仙人掌多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积及其相关基因表达的影响
发布时间：2019-11-13 01:24
【摘要】：采用PMA和ox LDL构建THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR BI基因表达的影响。结果显示:THP 1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP Ia能够显著减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR BI m RNA及蛋白表达(与单独ox LDL处理组比较,P0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P0.05),低、中剂量(5、10 nmol/L)ODP Ia作用效果均不显著。本研究结果表明,ODP Ia可通过增强ABCA1、ABCG1、SR BI基因表达来减少胞内胆固醇蓄积。
【图文】：
胶电泳电压为80V，分离胶电泳电压为120V)。待溴酚蓝电泳至胶底部时终止电泳。转膜，用5%脱脂牛奶封闭1h，用TBST洗3次后加入一抗，4℃孵育过夜。用TBST洗3次后加入二抗(稀释比例1∶3000)，孵育45~60min。孵育结束，用TBST洗3次，进行ECL显色曝光。将曝光后的底片扫描，并用Quantityone专业灰度分析软件进行分析，以GAPDH为内参，计算并比较各处理组蛋白表达量。1.2.8数据统计分析采用Excel2007进行绘图分析；运用SPSS17.0进行方差分析及两两比较(SNK q检验)。2结果与分析2.1THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞的建立如图1 a所示，培养的THP 1悬浮细胞加入PMA刺激6h后，悬浮细胞大部分贴壁，摇晃后不悬福形状由圆形变成双极性、多角形等不规则形状，并有伪足伸出，表明巨噬细胞诱导成功。图1 b所示，加入ox LDL培养巨噬细胞48h后，巨噬细胞吞噬大量ox LDL，产生大量脂质，细胞胀大，经油红O染色后，可观察到胞内脂质变成红色，戒环样包绕在细胞核周围，说明泡沫化成功。a巨噬细胞；b油红O染色。图1巨噬细胞的电镜观察及泡沫细胞的光镜观察结果Fig.1MacrophagesandfoamcellsoilredOstainingmapsab
138湖南农业大学学报(自然科学版)http://xb.hunau.edu.cn2017年4月2.2ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质蓄积的影响如图2 a所示，未泡沫化的巨噬细胞内没有脂质蓄积；加入ox LDL泡沫化后产生大量脂质(图2 b)。经15nmol/LODP Ia和依折麦布干预能减少泡沫细胞中脂质的蓄积(图2 e、图2 f)，且两者产生的效果相当；5、10nmol/LODP Ia对脂质蓄积的改善效果较小(图2 c、图2 d)。a空白组；b泡沫细胞组；cODP Ia低剂量组；dODP Ia中剂量组；eODP Ia高剂量组；f阳性对照组。图2ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质蓄积的影响效果Fig.2EffectofODP IaoncholesterolaccumulationinTHP 1macrophage-derivedfoamcells2.3ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积的影响如图3所示，高剂量ODP Ia和依折麦布干预均能显著降低泡沫细胞中总胆固醇含量(与只用ox LDL组比较，P<0.05)，，但低、中剂量组的作用不明显，表明ODP Ia干预剂量需达到15nmol/L才具有促进细胞总胆固醇外流的效果。此外，ODP Ia干预的效果比阳性对照依折麦布的弱(P<0.05)。abbbccd0100200300400500600700123456胆固总醇(/μoml·gm1 )组别1空白组；2泡沫细胞组；3ODP Ia低剂量组；4ODP Ia中剂量组；5ODP Ia高剂量组；6阳性对照组。图3各组别THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积量Fig.3ThecholesterolaccumulationinTHP 1macrophage-derivedfoamcellsofalldosegroups2.4ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中ABCA1、ABCG1、SR BImRNA表达的影响表2显示，加入ox LDL泡沫化后，泡沫细胞中ABCA1、ABCG1、SR BImRNA的表达显著下降(与空白组比较，P<0.05)。但是加入高剂量ODP
本文编号：2560063
【图文】：
胶电泳电压为80V，分离胶电泳电压为120V)。待溴酚蓝电泳至胶底部时终止电泳。转膜，用5%脱脂牛奶封闭1h，用TBST洗3次后加入一抗，4℃孵育过夜。用TBST洗3次后加入二抗(稀释比例1∶3000)，孵育45~60min。孵育结束，用TBST洗3次，进行ECL显色曝光。将曝光后的底片扫描，并用Quantityone专业灰度分析软件进行分析，以GAPDH为内参，计算并比较各处理组蛋白表达量。1.2.8数据统计分析采用Excel2007进行绘图分析；运用SPSS17.0进行方差分析及两两比较(SNK q检验)。2结果与分析2.1THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞的建立如图1 a所示，培养的THP 1悬浮细胞加入PMA刺激6h后，悬浮细胞大部分贴壁，摇晃后不悬福形状由圆形变成双极性、多角形等不规则形状，并有伪足伸出，表明巨噬细胞诱导成功。图1 b所示，加入ox LDL培养巨噬细胞48h后，巨噬细胞吞噬大量ox LDL，产生大量脂质，细胞胀大，经油红O染色后，可观察到胞内脂质变成红色，戒环样包绕在细胞核周围，说明泡沫化成功。a巨噬细胞；b油红O染色。图1巨噬细胞的电镜观察及泡沫细胞的光镜观察结果Fig.1MacrophagesandfoamcellsoilredOstainingmapsab
138湖南农业大学学报(自然科学版)http://xb.hunau.edu.cn2017年4月2.2ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质蓄积的影响如图2 a所示，未泡沫化的巨噬细胞内没有脂质蓄积；加入ox LDL泡沫化后产生大量脂质(图2 b)。经15nmol/LODP Ia和依折麦布干预能减少泡沫细胞中脂质的蓄积(图2 e、图2 f)，且两者产生的效果相当；5、10nmol/LODP Ia对脂质蓄积的改善效果较小(图2 c、图2 d)。a空白组；b泡沫细胞组；cODP Ia低剂量组；dODP Ia中剂量组；eODP Ia高剂量组；f阳性对照组。图2ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质蓄积的影响效果Fig.2EffectofODP IaoncholesterolaccumulationinTHP 1macrophage-derivedfoamcells2.3ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积的影响如图3所示，高剂量ODP Ia和依折麦布干预均能显著降低泡沫细胞中总胆固醇含量(与只用ox LDL组比较，P<0.05)，，但低、中剂量组的作用不明显，表明ODP Ia干预剂量需达到15nmol/L才具有促进细胞总胆固醇外流的效果。此外，ODP Ia干预的效果比阳性对照依折麦布的弱(P<0.05)。abbbccd0100200300400500600700123456胆固总醇(/μoml·gm1 )组别1空白组；2泡沫细胞组；3ODP Ia低剂量组；4ODP Ia中剂量组；5ODP Ia高剂量组；6阳性对照组。图3各组别THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积量Fig.3ThecholesterolaccumulationinTHP 1macrophage-derivedfoamcellsofalldosegroups2.4ODP Ia对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞中ABCA1、ABCG1、SR BImRNA表达的影响表2显示，加入ox LDL泡沫化后，泡沫细胞中ABCA1、ABCG1、SR BImRNA的表达显著下降(与空白组比较，P<0.05)。但是加入高剂量ODP
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1 刘晓燕;严士敏;龚慧;赵秀丽;陈凤玲;;小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2009年12期
本文编号：2560063
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