青稞F7-OMT基因的克隆及原核表达分析

发布时间：2019-11-20 16:23

【摘要】：类黄酮7-O-甲基转移酶(F7-OMT)具有甲基转移酶功能,能催化底物类黄酮甲基化产生植物抗毒素,提高植物的抗菌性。为了给进一步研究该酶蛋白的功能奠定基础,以青稞"94-19-1"为材料,采用同源克隆方法得到青稞F7-OMT基因编码片段。生物信息学分析表明,青稞F7-OMT开放阅读框(ORF)全长为1173bp,编码390个氨基酸,蛋白分子质量为42 207.8Da,等电点pI为5.36,无信号肽序列,具有甲基转移酶2(Methyltransf_2,pfam00891)和二聚化(Dimerization,pfam08100)保守域。通过亚克隆将F7-OMT连接到表达载体pET-32a上,构建pET-32a-F7-OMT融合表达载体,在E.coli BL21(DE3)pLysS中诱导表达,并采用亲和层析纯化法得到纯化蛋白。
【图文】：

物种ＯＭＴ家族中酶的相似性不一定更高，物种亲缘关系更近的功能相似的ＯＭＴｓ同源性越强，且７－ＯＭＴｓ并不是非常保守。方框中Ｄ表示Ａｓｐ２５８，为ＳＡＭ结合位点；方框中Ｈ表示Ｈｉｓ２９６，为接受质子的活性位点；＊表示终止密码子ＤｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＡｓｐ２５８ｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｏｆＳＡＭ；ＨｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＨｉｓ２９６ｆｏｒａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｏｆａｃｃｅｐｔｉｎｇｐｒｏｔｏｎｓ；＊ｉｓｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｃｏｄｏｎ图２青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的ＯＲＦ序列及其预测氨基酸序列Ｆｉｇ．２ＴｏｔａｌＯＲＦｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｕｔａｔｉｖｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦ７－ＯＭＴｇｅｎｅｉｎｈｕｌｌｅｓｓｂａｒｌｅｙ·２１第·１期牟利等：青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的克隆及原核表达分析

物种ＯＭＴ家族中酶的相似性不一定更高，物种亲缘关系更近的功能相似的ＯＭＴｓ同源性越强，且７－ＯＭＴｓ并不是非常保守。方框中Ｄ表示Ａｓｐ２５８，，为ＳＡＭ结合位点；方框中Ｈ表示Ｈｉｓ２９６，为接受质子的活性位点；＊表示终止密码子ＤｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＡｓｐ２５８ｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｏｆＳＡＭ；ＨｉｎｔｈｅｂｏｘｉｓＨｉｓ２９６ｆｏｒａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｏｆａｃｃｅｐｔｉｎｇｐｒｏｔｏｎｓ；＊ｉｓｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｃｏｄｏｎ图２青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的ＯＲＦ序列及其预测氨基酸序列Ｆｉｇ．２ＴｏｔａｌＯＲＦｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｕｔａｔｉｖｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦ７－ＯＭＴｇｅｎｅｉｎｈｕｌｌｅｓｓｂａｒｌｅｙ·２１第·１期牟利等：青稞Ｆ７－ＯＭＴ基因的克隆及原核表达分析

【共引文献】

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本文编号：2563621