葡萄ufgt基因克

发布时间：2020-01-20 12:22

【摘要】：花色苷(Anthocyanins),不仅能够提高植株适应和抵御逆境的能力,而且具有明显的保健功能,是决定红葡萄酒品质和感官质量的重要因素之一。植物体内UFGT是合成花色苷的最后一个关键酶,直接影响花色苷的含量。本试验以赤霞珠(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)葡萄为试材,在获得ufgt基因全长的基础上,制备多克隆抗体；定期对葡萄植株进行UV-C照射,在转录和翻译水平上研究UV-C照射对ufgt表达和花色苷积累的影响,主要结果如下：扩增葡萄果实ufgt基因全长1371 bp,并构建克隆载体。将克隆载体与表达载体pET-30a进行双酶切,重组得到表达载体pET-ufgt。优化蛋白表达条件,使UFGT蛋白高效表达并纯化,以此为抗原,免疫新西兰白兔,制备UFGT多克隆抗体。以赤霞珠葡萄果实为试材,研究对照和UV-C照射10 min后UFGT对花色苷含量变化规律的影响。采用荧光定量技术分析ufgt基因表达规律,结果表明UV-C照射10 min并未明显诱导ufgt基因的表达,其表达规律与对照大致相同；采用Western-blotting技术,分析UFGT蛋白含量变化规律,结果表明UV-C处理10 min没有改变UFGT蛋白的变化规律,但明显诱导了UFGT蛋白的积累；采用高效液相色谱技术和分光光度计法分别分析UFGT酶活性和花色苷含量的变化规律,结果表明UV-C照射10min后UFGT酶活性和花色苷含量均都高于对照；分析可知对照和UV-C照射10 min后花色苷含量与ufgt基因表达、蛋白含量及酶活性均呈显著正相关。由UFGT生物信息学分析可得,UFGT蛋白由456个氨基酸残基组成,分子量大小约为50 kDa,可能包含信号肽与蛋白跨膜结构,其二级结构由35.53% α-螺旋、16.67%延伸链和47.81%无规则卷曲组成。分析亲缘性可知,赤霞殊葡萄UFGT蛋白与山葡萄的同源性最高.与草莓同源性次之,与玉米的同源性较低。
【图文】：

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■逡逑Ｈ逡逑图７葡萄果实总ＲＮＡ电泳图逡逑Ｆｉｇ．７邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｆｒｏｍ邋ｇｒａｐｅ邋ｂｅｒｒｉｅｓ逡逑３．２邋居ｆ基因的民Ｔ－ＰＣ民扩增逡逑用Ｔａｋａｒａ公司的反转录试剂盒将葡萄果实总民ＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，再板进行ＰＣＲ扩增，，琼脂糖凝胶检测得到长度约为１５００邋ｂｐ的基因片段，与已／ｇｆ编码框基因大致相符。逡逑１逦Ｍ逡逑
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S663.1

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本文编号：2571270