肺痨康抗耐异烟肼肺结核的作用与KatG基因突变的关系研究

发布时间：2020-03-01 07:06

【摘要】：目的：通过采用全基因组重测序的方法,研究肺痨康抗耐异烟肼结核分枝杆菌的作用是否与KatG基因突变的回复或修复相关,为中医药治疗耐异烟肼肺结核的机制提供新思路。方法：1、实验动物分组：SPF级昆明种小鼠120只,初始体重为18-22g,随机分6组,每组20只小鼠,分别为空白组、标准菌组、耐异烟肼组、肺痨康组、异烟肼组、联合组；2、建立模型：空白组小鼠不做尾静脉注射结核杆菌；标准菌组各小鼠行尾静脉注射H37RV标准结核分枝杆菌菌株菌悬液(ATCC:27294)；其余四组小鼠分别行尾静脉注射耐异烟肼结核菌株菌悬液；3、药物干预：空白组、标准菌组、耐异烟肼组小鼠连续56天生理盐水灌胃,每天1次；肺痨康组、异烟肼组、联合组小鼠分别用肺痨康液、异烟肼液、肺痨康联合异烟肼混合液连续灌胃56天,每天1次；4、实验周期结束后各组小鼠分离肺组织进行细菌培养、病理切片观察及各组随机选取1-2只小鼠肺组织进行结核分枝杆菌DNA提纯测序。结果：1、除空白组,其余各组小鼠肺组织细菌培养均为阳性；2、肺组织病理形态学观察发现,除空白组,其余各组小鼠肺组织均呈不同程度的增生、渗出、坏死等病理形态；3、除空白组外,其余五组样本细菌基因组DNA重测序结果：在染色体NC_000962.3第2154724和2155168位置即KatG基因常见突变位点R463L和S315T位,标准菌组未见基因突变；耐异烟肼组存在基因多态性；药物干预组基因突变。经异烟肼、肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗后的耐异烟肼结核分枝杆菌全基因测序发现在染色体NC_000962.3上编码假定蛋白(hypothetical protein)的Rv0104、Rv2079、Rv3898c基因,编码转座酶触合蛋白(transposase fusion protein)的Rv3327基因,均突变为终止子。经肺痨康、肺痨康联合异烟肼干预治疗后的耐异烟肼结核分枝杆菌全基因测序发现染色体NC_000962.3上可能与编码氧化还原酶相关的RV0063基因发生呈多态性的突变,突变为终止子。结论：1、除空白组外,其余组小鼠均成功感染结核菌；2、经异烟肼、肺痨康、异烟肼联合肺痨康治疗后耐异烟肼结核分枝杆菌全基因组测序显示,KatG基因第463位和第315位碱基突变均无回复现象,说明肺痨康抗耐异烟肼结核杆菌的作用为回复或修复突变基因的假说在本次实验中未得到验证；3、经异烟肼、肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗后的耐异烟肼结核分枝杆菌全基因测序发现在染色体NC_000962.3上编码假定蛋白的基因Rv0104、Rv2079、Rv3898c及编码转座酶触合蛋白的基因Rv3327均突变为终止密码子,有待于进一步验证是否因药物干预的影响；4、经肺痨康及肺痨康联合异烟肼干预治疗后耐异烟肼结核分枝杆菌全基因组重测序发现染色体NC_000962.3上RV0063基因仅在这两组发生突变呈“多态性”。该基因可能编码氧化还原酶,可与过氧化还原酶ps00862共价位点FAD结合,该位置突变导致编码412谷氨酸的密码子变为终止密码,使氧化还原酶的编码终止,不能产生该氧化还原酶与上述共价FAD结合位点结合,这一突变可能降低了结合分枝杆菌对氧化还原酶活性的抗性,这是否与肺痨康抗耐异烟肼结核病的作用有相关性,目前尚不能肯定。
【图文】：

异烟胁组

图S联合组
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5

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1 陈曦,马s，

本文编号：2583967