棉花GbCBF2基因的克

发布时间：2020-03-04 12:36

【摘要】：为研究棉花CBF2基因在植物抗逆中的作用,构建了p CAMBIA1300-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T植物互补表达载体,并对拟南芥cbf2突变体进行遗传转化。以新海16 c DNA为材料,采用PCR的方法克隆4个棉花CBF2基因,同时克隆拟南芥CBF2基因启动子At CBF2P和终止子At CBF2T,并将这些基因与p Bluescript SK载体连接,构建p Bluescript SK-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T中间过渡载体,用SacⅠ和Bam HⅠ双酶切中间载体,获得At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T核心片段,将此片段插入到p CAMBIA1300表达载体中,构建p CAMBIA1300-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T植物互补表达载体。以拟南芥cbf2突变体为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,获得转棉花CBF2基因群体。获得转基因株系后,将为筛选出棉花的CBF2抗冻负调控基因及棉花抗逆分子育种奠定基础。
【图文】：

44华北农学报31卷A．菌落PCＲ分析;B．载体的酶切鉴定;M．Trans1KDNAMarker;1、3、4、6、10、11为阳性克拢A．ColonyPCＲ;B．Enzymedigestionofvector;M．Trans1KDNAMarker;1，3，4，6，10，11areforpositiveclones．图3pBluescriptSK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T载体的构建与鉴定Fig．3ConstructionandidentificationofpBluescriptSK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2TvectorM．Trans1KDNAMarker;1，4，6，8，10为正确的pCAMBIA1300-GbCBF2。M．Trans1KDNAMarker;1，4，6，8，10arefortherightpCAMBIA1300-GbCBF2clone．图4pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T互补表达载体酶切分析Fig．4AnlysisofenzymedigestionofcomplementaryexpressionvectorpCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T图5转基因植株抗性筛选Fig．5Theresistancescreeningoftransgenicplant3讨论CBF/DＲEB转录因子能特异性与胁迫诱导基因启动子区域的CＲT/DＲE(C-repeat/dehydration-re-sponsiveelement)顺式作用元件结合，激活抗逆功能基因的表达，最终通过基因产物的作用增强植物的抗逆性［13－14］。拟南芥CBF1/DＲEB1C、CBF2/DＲEB1B、CBF3/DＲEB1A，在植物抗冻反应中扮演中心的调控角色;超表达CBF1和CBF3都能显著提高植物的抗冻性［15－16］。而CBF2基因虽然与CBF1和CBF3基因高度同源，但在植物抗逆中却扮演重要的负调控角色。该基因负调控CBF1和CBF3的表达，其突变失活后，CBF1和CBF3基因的表达都同时显著提高，因此拟南芥的抗冻性显著增强［17－18］。与CBF1和CBF3过量表达植株不同的是，在cbf2突变体中CBF1和CBF3基因的表达并不是持续地提高，其表达受到了严格调控，在冷胁迫后期两者的表达量又逐渐下降，从而使CBF1和CBF3基因过量表达在生长发育上所产?

Trans1KDNAMarker;1，3，4，6，10，11areforpositiveclones．图3pBluescriptSK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T载体的构建与鉴定Fig．3ConstructionandidentificationofpBluescriptSK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2TvectorM．Trans1KDNAMarker;1，4，6，8，10为正确的pCAMBIA1300-GbCBF2。M．Trans1KDNAMarker;1，4，6，8，10arefortherightpCAMBIA1300-GbCBF2clone．图4pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T互补表达载体酶切分析Fig．4AnlysisofenzymedigestionofcomplementaryexpressionvectorpCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T图5转基因植株抗性筛选Fig．5Theresistancescreeningoftransgenicplant3讨论CBF/DＲEB转录因子能特异性与胁迫诱导基因启动子区域的CＲT/DＲE(C-repeat/dehydration-re-sponsiveelement)顺式作用元件结合，激活抗逆功能基因的表达，最终通过基因产物的作用增强植物的抗逆性［13－14］。拟南芥CBF1/DＲEB1C、CBF2/DＲEB1B、CBF3/DＲEB1A，在植物抗冻反应中扮演中心的调控角色;超表达CBF1和CBF3都能显著提高植物的抗冻性［15－16］。而CBF2基因虽然与CBF1和CBF3基因高度同源，但在植物抗逆中却扮演重要的负调控角色。该基因负调控CBF1和CBF3的表达，其突变失活后，CBF1和CBF3基因的表达都同时显著提高，因此拟南芥的抗冻性显著增强［17－18］。与CBF1和CBF3过量表达植株不同的是，在cbf2突变体中CBF1和CBF3基因的表达并不是持续地提高，其表达受到了严格调控，在冷胁迫后期两者的表达量又逐渐下降，从而使CBF1和CBF3基因过量表达在生长发育上所产生的负效应得到了很好的控制。因此，，cbf2突变体最突出的表现是，虽然植株的抗冻性明显增加，但cbf2突变体在生长发育上与野生型相比并没有明显差异［1

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