杨梅果糖激酶基因MrFRK2的克隆及在成熟期果实中的表达分析
【图文】：
ACE技术获得了长度约为1060bp和160bp的5′和3′端序列（图1，B、C），将这2条序列与中间片段序列进行拼接，获得基因全长cDNA序列，共1279bp。MrFRK2全长cDNA序列包含1个ATG起始密码子和TAG终止密码子，其中3′端非编码区227bp，5′端非编码区56bp。ORF阅读框全长996bp，编码1个含有332个氨基酸残基的蛋白，预测的等电点（pI）为4.80，预测分子量为35.67kD。根据获得的基因全长cDNA序列设计全长特异引物fFRK2F和fFRK2R进行RT-PCR，得到1条长1268bp（图1，D）的片段，并通过测序验证与软件拼接获得的MrFRK2全长cDNA序列一致。图1MrFRK2的克隆电泳图A：中间片段扩增；B：5′-RACE扩增；C：3′-RACE扩增；D：cDNA全长扩增；M：DL100marker。Fig.1GelelectrophoresisofMrFRK2cDNAsA：Middlesegment；B：5′-RACEsegment；C：3′-RACEsegment；D：Full-lengthcDNA；M：DL100marker.
RK2（苜蓿Medicagotruncatula，KEH30339.1）、PtFRK2（杨树Populustrichocarpa，XP_006372861.1）、CcFRK2（克莱门柚Citrusclementina，XP_006443006.1）、VvFRK2（葡萄Vitisvinifera，XP_002268097.1）、AcFRK2（猕猴桃Actinidiachinensis，AFO84081.1）、SlFRK2（番茄Solanumlycopersicum，NP_001233888.1）、AtFRK2（拟南芥Arabidopsisthaliana，NP_172093.1）、StFRK2（马铃薯Solanumtuberosum，ABB29956.1）、MdFK4（苹果Malus×domestica，NP_001281027.1）和EjFRK2（枇杷Eriobotryajaponica，ACL01290.1），比对结果如图2所示。结果发现，MrFRK2氨基酸序列含有碳水化合物磷酸果糖激酶家族（pfkBfamily）高度保守功能结构域，包括1个ATP结合域（ATPbindingdomain），，2个底物识别域（substraterecognitiondomains）以及2个蛋白磷酸化位点（pfkB）。图2杨梅果实MrFRK2的氨基酸序列对比图Fig.2AlignmentofthededucedMrFRK2aminoacidsequenceswithFRK2sfromotherplants
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