牛乳头状瘤病诊断及其病毒基因型分析
发布时间：2020-04-07 02:30
【摘要】：对贵州省晴隆县某种牛场暴发的疑似牛乳头状肿瘤病进行诊断,采用流行病学调查、临床症状观察、病理切片观察、PCR检测和分子分型。结果显示,该种牛场牛乳头状瘤病发病率为35%(7/20)。瘤体多呈结节状及菜花状,颜色多呈灰白色。病理切片显示,瘤体呈现角质化过度和细胞空泡化现象。遗传进化树分析显示,贵州省晴隆县暴发的牛乳头状肿瘤病是由BPV2型牛乳头瘤病毒所引起。本研究为贵州地区牛乳头状瘤病的科学防控提供了一定的理论依据。
【图文】：
诿娌俊⒀劬χ?围、颈部等位置。严重病例在面部、颈部均能见到大面积乳头状瘤状物，瘤体间单独或者连成一片生长。瘤体多呈菜花状，颜色呈灰白色，表面光滑或粗糙、质地坚硬。3.2病理组织学切片结果对皮肤肿瘤样物病理组织切片，经H.E.染色镜检显示，表皮与真皮增生;肿瘤细胞呈梭形或星型，核呈卵圆形;表皮细胞呈现过度角质化和部分颗粒细胞空泡化的现象，结果见中插彩版图1A和1B。3.3PCＲ检测结果牛乳头状瘤疑似病料中，PCＲ检测阳性样品，经1．2%琼脂糖凝胶电泳检测，所扩增的目的PCＲ产物的大小约1494bp，结果见图2。图2牛乳头状瘤疑似病料PCＲ产物电泳检测结果M:DL-2000DNAMarker;1～3:扩增结果;—:阴性对照3.4BPVL1基因核苷酸序列同源性分析将本实验克隆的L1基因(命名为BPV-QL1)与GenBank上公布的16株BPV各型的L1基因的对应序列进行比对分析，结果显示，贵州省晴隆流行株与BPV2、BPV2-SW01和BPV2-AKS01参考株的核苷酸同源性分别为99．1%、99．9%、99．4%，同时与BPV13参考株、BPV1参考株的核苷酸同源性也达88．8%、84．4%，结果见图3。3.5BPVL1基因遗传进化树分析L1基因是BPV基因组中比较保守的衣壳蛋白，通常用于各型病毒之间的基因分型。将各型BPV的L1基因序列进行对比分析，并采用NJ法(Neighbor-JingMethod)构建BPV系统进化树(图4)。经DNAStar分析表明，BPV-GZ01与BPV2处于同一遗传进化分支，所以BPV-QL1属于2型牛乳头瘤病毒，且与BPV-1、BPV-13亲缘关系比较接近。4讨论牛乳头状瘤病毒(BPV)属于乳多空病毒(pa-povavirus)科乳头状病毒属［10］的一种双链DNA病毒，已报道有14个基因型，还有很多假定基因型。在本研究中，根据牛的临床症状［8－9］查阅相关资料，针对BPVL1保守序列设计特异性引物进行PC?
ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2017年(第53卷)第5期图3BPV－QL1株与BPV不同基因型的L1基因核苷酸序列比较BPV1(X02346)、BPV2(M20219)、BPV2－SW01(KC878306)、BPV2－AKS01(KM455051)、BPV3(AF486184)、BPV4(X05817)、BPV5(AF457465)、BPV6(AJ620208)、BPV7(DQ217793)、BPV8(DQ098913)、BPV9(AB331650)、BPV10(AB331651)、BPV11(AB543507)、BPV12(JF834523)、BPV13(JQ798171)、BPV14(KP276343)图4L1基因序列构建的不同基因型BPV系统进化树发病牛和健康牛群居是导致牛之间互相感染牛乳头状瘤病毒的主要原因。该病一般呈良性经过，死亡率不高，但康复时间比较长，可用手术方法摘除瘤体，术后及时护理，并加强饲养管理，，及时隔离病牛等措施进行预防和治疗。近两年贵州省大力发展养牛业，从国外和省外引进了优质的种牛，同时许多外来疾病也随之带入，从而威胁着贵州省养牛业的发展，给养牛业带来巨大的挑战。此次诊断为贵州地区外来疾病的科学防控提供了一定的理论依据。参考文献:［1］BrandtS，ApprichV，HacklV，etal．Prevalenceofbovinepapillo-mavirusandTreponemaDNAinbovinedigitaldermatitislesions［J］．Veterinarymicrobiology，2011，148(2):161-167．［2］OgawaT，TomitaY，OkadaM，etal．Broad－spectrumdetectionofpapillomavirusesinbovineteatpapillomasandhealthyteatskin［J］．Journalofgeneralvirology，2004，85(8):2191-2197．［3］梁辰，姜晓文，刘旭，等．牛乳头状瘤的病理学观察及其病毒基因型分析［J］．中国预防兽医学报，2013，35(5):423-425．［4］贺志昊，刘贤侠，乔军，等．奶牛乳头状瘤病理学诊断及病原分子检测研究［J］．石河子大学学报，2013，31(6):7383-7384．［5］ＲopertoS?
本文编号：2617328
【图文】：
诿娌俊⒀劬χ?围、颈部等位置。严重病例在面部、颈部均能见到大面积乳头状瘤状物，瘤体间单独或者连成一片生长。瘤体多呈菜花状，颜色呈灰白色，表面光滑或粗糙、质地坚硬。3.2病理组织学切片结果对皮肤肿瘤样物病理组织切片，经H.E.染色镜检显示，表皮与真皮增生;肿瘤细胞呈梭形或星型，核呈卵圆形;表皮细胞呈现过度角质化和部分颗粒细胞空泡化的现象，结果见中插彩版图1A和1B。3.3PCＲ检测结果牛乳头状瘤疑似病料中，PCＲ检测阳性样品，经1．2%琼脂糖凝胶电泳检测，所扩增的目的PCＲ产物的大小约1494bp，结果见图2。图2牛乳头状瘤疑似病料PCＲ产物电泳检测结果M:DL-2000DNAMarker;1～3:扩增结果;—:阴性对照3.4BPVL1基因核苷酸序列同源性分析将本实验克隆的L1基因(命名为BPV-QL1)与GenBank上公布的16株BPV各型的L1基因的对应序列进行比对分析，结果显示，贵州省晴隆流行株与BPV2、BPV2-SW01和BPV2-AKS01参考株的核苷酸同源性分别为99．1%、99．9%、99．4%，同时与BPV13参考株、BPV1参考株的核苷酸同源性也达88．8%、84．4%，结果见图3。3.5BPVL1基因遗传进化树分析L1基因是BPV基因组中比较保守的衣壳蛋白，通常用于各型病毒之间的基因分型。将各型BPV的L1基因序列进行对比分析，并采用NJ法(Neighbor-JingMethod)构建BPV系统进化树(图4)。经DNAStar分析表明，BPV-GZ01与BPV2处于同一遗传进化分支，所以BPV-QL1属于2型牛乳头瘤病毒，且与BPV-1、BPV-13亲缘关系比较接近。4讨论牛乳头状瘤病毒(BPV)属于乳多空病毒(pa-povavirus)科乳头状病毒属［10］的一种双链DNA病毒，已报道有14个基因型，还有很多假定基因型。在本研究中，根据牛的临床症状［8－9］查阅相关资料，针对BPVL1保守序列设计特异性引物进行PC?
ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2017年(第53卷)第5期图3BPV－QL1株与BPV不同基因型的L1基因核苷酸序列比较BPV1(X02346)、BPV2(M20219)、BPV2－SW01(KC878306)、BPV2－AKS01(KM455051)、BPV3(AF486184)、BPV4(X05817)、BPV5(AF457465)、BPV6(AJ620208)、BPV7(DQ217793)、BPV8(DQ098913)、BPV9(AB331650)、BPV10(AB331651)、BPV11(AB543507)、BPV12(JF834523)、BPV13(JQ798171)、BPV14(KP276343)图4L1基因序列构建的不同基因型BPV系统进化树发病牛和健康牛群居是导致牛之间互相感染牛乳头状瘤病毒的主要原因。该病一般呈良性经过，死亡率不高，但康复时间比较长，可用手术方法摘除瘤体，术后及时护理，并加强饲养管理，，及时隔离病牛等措施进行预防和治疗。近两年贵州省大力发展养牛业，从国外和省外引进了优质的种牛，同时许多外来疾病也随之带入，从而威胁着贵州省养牛业的发展，给养牛业带来巨大的挑战。此次诊断为贵州地区外来疾病的科学防控提供了一定的理论依据。参考文献:［1］BrandtS，ApprichV，HacklV，etal．Prevalenceofbovinepapillo-mavirusandTreponemaDNAinbovinedigitaldermatitislesions［J］．Veterinarymicrobiology，2011，148(2):161-167．［2］OgawaT，TomitaY，OkadaM，etal．Broad－spectrumdetectionofpapillomavirusesinbovineteatpapillomasandhealthyteatskin［J］．Journalofgeneralvirology，2004，85(8):2191-2197．［3］梁辰，姜晓文，刘旭，等．牛乳头状瘤的病理学观察及其病毒基因型分析［J］．中国预防兽医学报，2013，35(5):423-425．［4］贺志昊，刘贤侠，乔军，等．奶牛乳头状瘤病理学诊断及病原分子检测研究［J］．石河子大学学报，2013，31(6):7383-7384．［5］ＲopertoS?
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本文编号：2617328
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