KCTD10基因敲低对人肝癌干样细胞特性影响

发布时间：2020-04-09 22:48

【摘要】：目的:检定在人肝细胞癌细胞中,抑制KCTD10蛋白的表达能否影响肝癌细胞的干细胞样特性及其分子机制。方法:使用包装KCTD1O siRNA序列的慢病毒感染人肝癌细胞系Hep3B细胞和MHCC97H细胞,qPCR和蛋白质印迹(WB)的方法确认抑制效果。肿瘤球形成实验、平皿集落形成实验、细胞增殖实验和划痕实验分析抑制KCTD10表达对肝癌细胞体外致瘤性、自我更新能力和细胞体外迁移能力的影响。分别用qPCR、WB实验和荧光抗体标记流式细胞实验检测干细胞标记基因以及Notch信号通路的影响。结果:转染包装了 KCTD10 siRNA序列的慢病毒可以有效抑制Hep3B和MHCC97H细胞中KCTD10mRNA和蛋白含量;抑制KCTD1O的表达可以增加肿瘤球形成率、平皿集落形成能力,增强细胞增殖速率、细胞体外迁移能力,并增强肝癌干细胞标记基因CD133、OCT4以及Bmi1基因的mRNA水平,以及肝癌干细胞标记基因多能转录因子Nanog、乙醛脱氢酶1家族成员A1(ALDH1A1)蛋白水平;增加肝癌细胞中CD133+细胞比例。同时,抑制KCTD10蛋白的表达可以影响Notch信号通路的表达调控。结论:1.抑制Kctd10基因表达可以增强肝癌细胞致瘤性。2.抑制Kctd10基因表达可以增强肝癌干细胞特性。3.在肝癌细胞中抑制Kctd10基因表达能影响Notch信号通路的表达调控。
【图文】：

过ＲＴ－ＰＣＲ方法检测尤以川基因ｍＲＮＡ的含量，３６Ｂ４作为内参。首先，复肝癌细胞系细胞，而后取各肝癌细胞系对数生长期细胞，提取各型细胞的ＲＮＡ；通过Ｓｙｎｅｒｇｙ多功能酶标仪检测ｍＲＮＡ的含量以及质量，结果显示，逡逑６０／２８０的范围基本控制在１．８－２．０之间（表６）。为了进一步检测提取的ｍＲＮ质量，我们将提取的ＲＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳，，结果显示，总ｍＲＮＡ在１８Ｓ及２８Ｓ的亮度较高，说明提取的ｍＲＮＡ的质量较高（图卜１）。逡逑表６各型细胞的ｍＲＮＡ的２６０／２８０的比值以及含量逡逑ｖ°逦ｖ逦＾逦＾逦＾逦々逡逑６０（ｎｍ）逦１．２１８逦１．４２３逦２．１７８逦０．９６１逦０．７５逦１．２２３逦２．２２４逡逑８０（ｎｍ）逦０．６４２逦０．７４２逦１．１３２逦０．６２６逦０．３９６逦０．６４８逦１．２１逡逑６０／２８０逦１．８９９逦１．９１７逦１．９２４逦１．５３４逦１．８９３逦１．８８８逦１．８３７逡逑度（ｎｇ＿Ｌ）邋９７４．６０３逦１１３８．５９９逦１７４２．７８５逦７６８．６７９邋６００．１９５逦９７８．７９１邋１７７９．２５４逡逑

３．２．１人肝细胞癌Ｈｅｐ３Ｂ细胞系细胞体外培养逡逑使用细胞完全培养基培养人肝细胞癌Ｈｅｐ３Ｂ细胞，Ｈｅｐ３Ｂ细胞在细胞培养逡逑瓶中呈单层贴壁生长（图２－１），细胞呈多边形，折光性好，培养２天，细胞贴壁逡逑率可达９０％。逡逑W逡逑图２－１邋Ｈｅｐ３Ｂ细胞系单层贴壁生长细胞倒置相差显微镜图像（１００Ｘ）逡逑１４逡逑
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 王菊;符毓豪;王维山;王端明;周宗瑶;;Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化中的甲基化状态[J];中国医学科学院学报;2013年03期

2 孙吉康;张波;张健;周建林;;小鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小鼠背神经上皮和背根神经节中的表达[J];生物工程学报;2007年06期

本文编号：2621359