微滴式数字PCR定量监测C-KIT基因突变水平在核心结合因子白血病中的临床意义

发布时间：2020-05-07 21:25

【摘要】：目的:C-KIT基因在核心结合因子急性髓系白血病(CBF-AML)患者中的发生率为30-50%,伴C-KIT基因突变的CBF-AML(本研究中用CBF-AML-CK表示)患者预后差,标准化治疗达到完全缓解(CR)后易复发,因此缓解期的MRD监测对患者意义重大,目前主要通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因水平,以及流式细胞术(FCM)检测异常表型的白血病细胞(LAIP)比例等。本研究旨在利用微滴式数字PCR(ddPCR)研究CR时C-KIT基因突变水平与预后的关系,从而将C-KIT基因作为分子标志物监测MRD,为预测复发、评估预后、及时调整治疗方案等提供临床指导。方法:1、收集20例CBF-AML-CK患者的骨髓标本并提取DNA、RNA保存。2、采用基于MGB探针的ddPCR技术,在DNA水平绝对定量20例CBF-AMLCK患者的C-KIT基因突变水平。3、采用基于TaqMan探针的RT-qPCR技术,在cDNA水平检测20例CBF-AMLCK患者的RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因水平。4、普通PCR法扩增C-KIT基因并进行Sanger一代测序法检测20例CBF-AMLCK患者的C-KIT基因突变。5、应用流式细胞术检测20例CBF-AML-CK患者的异常表型白血病细胞的比例。结果:1、根据随访期间患者是否复发将20例CBF-AML-CK患者分为持续缓解组和复发组,CR时C-KIT基因平均突变水平在持续缓解组(6例)为0.07324±0.32116%,在复发组(14例)为8.79605±4.44686%,两组之间的差异有统计学意义(P=0.005)。2、CR时C-KIT基因的突变水平与相应的RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因的表达水平的相关系数为0.618,两指标之间的相关性有统计学意义(P=0.004)。3、根据CR时C-KIT基因的突变水平分组,与低水平组相比,高水平组的一年复发率高(P=0.004)、一年生存率低(P=0.039),两组之间的差异均有统计学意义。4、CR时C-KIT基因的突变水平与一年复发率、生存率、OS、EFS、CRD之间的相关系数均比RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因表达水平高,并且动态结果显示C-KIT基因的突变水平在复发前上升程度更明显、时间更提前。5、ddPCR、RT-qPCR、FCM、Sanger一代测序四种方法检测MRD的结果比较显示ddPCR的阳性检出率最高,并且与其他方法比较差异有统计学意义;Sanger一代测序对复发的预测与其它三种方法相比有统计学意义(P=0.008),ddPCR、RT-qPCR与其他方法相比对生存的预测有统计学意义(P=0.003,P=0.021)。6、四种方法检测得到的MRD结果与预后的关系比较显示:年龄≥11.5岁、男性患者、LAIP比例高、C-KIT基因突变水平高、SWOG分组未达到CRm均为影响预后的不利因素。结论:1、CR时C-KIT基因的突变水平是影响CBF-AML-CK患者预后的重要因素,C-KIT基因可以作为MRD分子学标志。2、ddPCR技术比其他技术更能敏感地反映患者的MRD情况。
【图文】：

-1复发组与缓解组的OS、EFS分析

准确性

-3两指标预测复发的准确性比较
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.71

【参考文献】