Tbx3基因在小鼠胚胎干细胞中表达的表观遗传学调控

发布时间：2020-05-13 10:48

【摘要】：工作目的:探究Tbx3基因在小鼠胚胎干细胞中表达的表观遗传学调控。研究方法:1、首先,通过RT-qPCR实验,检测DPF2敲除细胞中Tbx3基因的表达,确定DPF2对Tbx3的调控情况。然后,通过CHIP-seq和荧光素酶实验(luciferase Assay)找到小鼠胚胎干细胞中Tbx3基因的潜在增强子位点;其次,运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,对Tbx3基因Enhancer-2、Enhancer-3-6和Enhancer-7位点进行敲除,检测对Tbx3表达的调控情况;最后,对DPF2敲除细胞进行CHIP-seq分析,研究验证DPF2对Tbx3的调控位点以及调控机制;2、首先,通过DPF2敲除细胞的CHIP-seq实验,发现Tbx3基因Enhancer-2位点存在PRC2介导的H3K27me3修饰;其次,为验证PRC2对Tbx3表达的调控作用,构建小鼠EED基因条件性敲除的ES细胞;最后,进行EED敲除细胞的CHIP-Seq分析,分析干性相关蛋白Oct4和Sox2在Enhancer-2位点的变化。结果:1、小鼠ES细胞DPF2敲除显著降低了Tbx3基因的表达;2、Enhancer-7位点敲除显著降低了Tbx3基因在小鼠ES细胞的表达;3、DPF2敲除,Tbx3基因的Enhancer-7位点H3K27Ac和干性相关转录因子OCT4的结合能力减弱;4、Enhancer-2位点敲除并未影响Tbx3基因在小鼠ES细胞的表达;5、EED敲除显著升高了Tbx3基因在小鼠ES细胞的表达;6、EED敲除,Tbx3基因Enhancer-2位点H3K27me3修饰减弱,干性相关转录因子Oct4和Sox2的结合增加。结论:综上所述,在小鼠胚胎干细胞中,Tbx3基因存在两个特异的增强子Enhancer-7和Enhancer-2,分别受染色质重塑因子DPF2和PRC2调控。DPF2通过影响Enhancer-7区域的H3K27Ac修饰以及Oct4蛋白在Enhancer-7上的结合,从而正向调控Tbx3基因的表达;PRC2通过调控Tbx3 Enhancer-2的H3K27me3修饰,进而调控Oct4、Sox2等在Enhancer-2的结合,从而对Tbx3基因的表达起到抑制作用。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：Q756

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