丝氨酸蛋白酶编码基因prtP对副干酪乳杆菌黏附特性的影响

发布时间：2020-06-02 08:36

【摘要】：为探讨丝氨酸蛋白酶编码基因prtP对副干酪乳杆菌黏附特性的影响,利用λRed重组系统敲除副干酪乳杆菌的prtP基因,构建副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株,比较突变株与亲本株的表面结构、黏附特性的差异。结果表明,prtP基因缺失突变株的生长速度变慢,疏水性和自聚合性明显下降,抑菌效果无显著性差异,对抗生素的敏感性发生了显著变化,体外对细胞的黏附性显著降低。可见,prtP基因对副干酪乳杆菌的黏附特性十分重要,该基因缺失将改变菌株的生物学特性。
【图文】：

Ｓ?7℃、5%CO2细胞培养箱中孵育48h。待细胞完全贴壁，以无菌PBS洗涤2次，每孔加入1ml浓度为1×108CFU/ml的乳酸菌悬液，孵育1～2h。以镜检法和涂布平板法评价副干酪乳杆菌亲本株及其prtP基因缺失突变株L．p△prtP对3种细胞的黏附性。2结果与分析2．1突变株L．pΔprtP的鉴定根据GenBank公布的副干酪乳杆菌的基因序列，分析启动子和开放性阅读框，结果显示基因prtP拥有独立的单个开放阅读框，含有7820个碱基对。插入氯霉素突变后，以突变副干酪乳杆菌为模板，用引物PS/PA进行PCＲ鉴定，得到1175bp的片段(图1)，与预期结果一致，证实得到的菌株为副干酪乳杆菌突变株。图1副干酪乳杆菌突变株(L．p△prtP)的prtP基因片段PCＲ扩增Fig．1PCＲamplificationofprtPgenefragmentinthemutantstrainofLactobacillusparacasei(L．pΔprtP)2．2副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株与亲本株的表面结构差异在透射电镜下，副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株(L．pΔprtP)与其亲本株的表面结构无明显差异，细胞表面的黑斑状阴影可能是被吸附到表面的杂质(图2)。刘昭等:丝氨酸蛋白酶编码基因prtP对副干酪乳杆菌黏附特性的影响685

A:副干酪乳杆菌亲本株;B:副干酪乳杆菌突变株。图2副干酪乳杆菌亲本株及其突变株(L．pΔprtP)电镜图Fig．2ElectronmicroscopicimagesofL．paracaseiparentalstrainandL．paracaseimutantstrain(L．pΔprtP)2．3副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株的生长曲线副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株的生长曲线与其亲本株类似，都经历了适应期、对数期和平台期，但突变株的生长速度明显慢于亲本株(图3)。在MＲS培养基中，从第4h开始两菌株的生长速度出现差异，亲本株在第11h时生长速度接近稳定，而突变株此时仍在对数期，直到第16h时才开始稳定。图3副干酪乳杆菌亲本株和突变株的生长曲线Fig．3ThegrowthcurveforL．paracaseiparentalstrainandmutantstrain2．4副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株的表面疏水性由图4可以看出，副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株与亲本株的表面疏水性差异很大，亲本株的疏水性达到85.5%，而突变株仅为35.6%，差异显著(P＜0.01)。在试管中副干酪乳杆菌亲本株菌液澄清透明，突变株菌液明显浑浊。2．5副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株的自聚合能力副干酪乳杆菌突变株与亲本株的自聚合能力差＊＊表示差异极显著(P＜0．01)。图4副干酪乳杆菌亲本株和突变株的表面疏水性Fig．4ThesurfacehydrophobicpropertyofL．paracaseipa-rentalstrainandmutantstrain异极显著(P＜0.01)，分别为16.9%、33.1%(图5)。在MＲS培养基中，副干酪乳杆菌亲本株聚集明显，，而突变株菌液比较清澈，聚集较少。＊＊表示差异极显著(P＜0．01)。图5副干酪乳杆菌亲本株和突变株的自聚合能力Fig．5TheautoaggregationofL．paracaseiparentalstrainandmutantstrain2．6副干酪乳杆菌prtP基因缺失突变株的抑菌能力采用打孔法测定副干

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