黄姑鱼IGF家族相关基因克隆及在不同赖氨酸水平下表达

发布时间：2020-06-04 03:20

【摘要】：IGF家族基因主要有调控细胞的生长、增殖和抑制细胞凋亡的功能,对鱼类的生长调控发挥着十分重要的作用。本实验获得了黄姑鱼IGF-1、IGF-1R和IGF-BP2基因的全长序列和IGF-2R的核心片段,同时采用Real time PCR技术分析了黄姑鱼IGF-1、IGF-1R、IGF-2R和IGF-BP2基因在黄姑鱼肌肉、心脏、大脑、脾脏、胃、肠、肝脏、鳃和肾脏这九种组织内的表达情况以及饲料中添加不同赖氨酸水平对黄姑鱼肝脏和肌肉中IGF-1、IGF-1R、IGF-2R和IGF-BP2基因的表达影响。主要研究结果如下:1.IGF家族相关基因克隆表达。研究克隆了黄姑鱼IGF-1基因的全长序列(GenBank登录号为MG004542),基因全长为939bp,包含561bp的开放阅读框,共编码186个氨基酸,相对分子量为20.561 Daltons,等电点为9.63。Real time PCR分析显示黄姑鱼IGF-1在黄姑鱼九种组织内均有表达,其中在肝脏中表达量最高;克隆了黄姑鱼IGF-1R基因的全长序列,IGF-1R cDNA全长序列为5403bp,包含4260bp的开放阅读框,共编码1419个氨基酸,预测相对分子量为159820.67Daltons,等电点为5.72。Real time PCR分析显示黄姑鱼IGF-1R在黄姑鱼九种组织内均有表达,在肌肉中表达量最高,另外心脏、大脑和鳃中也有较高的表达量;克隆了黄姑鱼IGF-2R的cDNA序列,片段长度为257bp。Real time PCR分析显示黄姑鱼IGF-2R在黄姑鱼九种组织内均有表达,肌肉中的表达量最高,鳃其次;克隆了黄姑鱼IGF-BP2基因的全长序列,cDNA全长序列为1417bp,其中包含了882bp的开放阅读框。共编码293个氨基酸,预测相对分子量为32874.84Daltons,等电点为7.75。Real time PCR分析显示黄姑鱼IGF-BP2在黄姑鱼大脑和肝脏中的表达量最高,在黄姑鱼肌肉组织中不表达。2.饲料中不同赖氨酸水平对IGF家族相关基因表达的影响。实验根据饲料中赖氨酸添加比例0%(L0组)、0.5%(L0.5组)、1.0%(L1.0组)、1.5%(L1.5组)、2.0%(L2.0组)、2.5%(L2.5组)共配制6组饲料。结果显示饲料中不同赖氨酸水平显著影响了黄姑鱼肌肉和肝脏组织中IGF-1表达。黄姑鱼肝脏中L1.5组IGF-1基因表达量最高(P0.05)。黄姑鱼肌肉中L0.5组IGF-1基因表达最高;饲料中不同赖氨酸水平显著影响了黄姑鱼肌肉和肝脏组织中IGF-1R表达。黄姑鱼肝脏中L2.0组IGF-1R表达量最高且显著高于其余各组(P0.05)。黄姑鱼肌肉中L1.0组和L2.5组IGF-1R表达量显著高于其余各组(P0.05);饲料中不同赖氨酸水平显著影响了黄姑鱼肌肉和肝脏组织中IGF-2R表达。黄姑鱼肝脏中L0.5组IGF-2R表达量最高。在肌肉组织中,L1.0组和L2.5组IGF-2R表达量显著高于其余各组(P0.05);饲料中不同赖氨酸水平显著影响了黄姑鱼肝脏中IGF-BP2表达。黄姑鱼肝脏中L0.5组IGF-BP2表达量最高。黄姑鱼肌肉中IGF-BP2不表达。
【学位授予单位】：浙江海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4

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本文编号：2695815