GP73基因沉默诱导Hep G2细胞株自噬对细胞活力和凋亡的影响

发布时间：2017-03-28 06:11

  本文关键词：GP73基因沉默诱导Hep G2细胞株自噬对细胞活力和凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景我们的前期研究显示,在沉默GP73基因的Hep G2细胞株中存在较高水平的自噬现象,作为一种分子生物学现象,自噬已经被证实对多种肿瘤的一系列行为发挥着重要的影响。目的本研究的目的在于进一步与肿瘤细胞比较GP73基因沉默细胞中其诱导所产生自噬的水平,初步探索此种自噬对于Hep G2细胞活力和凋亡的影响。方法设计针对人类GP73基因的小干扰RNA(siRNA),并在Hep G2细胞株中进行沉默其表达。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在信使RNA(mRNA)水平和通过酶联免疫吸附实验(ELISA)在蛋白质水平检测沉默效率。使用甲丹磺酰尸胺(MDC)染料和和Beclin 1检测在一般形态和定性分析方面确定自噬的水平。同时联合使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制剂和雷帕霉素诱导剂,观察其对自噬的影响,并进一步研究改变后的自噬水平对于Hep G2细胞的影响。细胞活力和凋亡的影响分别通过3,4,5-三羟基苯甲酸二聚体(MTT)实验和流式细胞术进行观察和测定。结果沉默GP73基因后,和空白对照组比较其mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。MDC染色结果显示,沉默后细胞的荧光密度和MDC标记的细胞数量均较高,同时可特异性反应自噬水平的Beclin 1基因亦较对照组增高(P0.05)。而GP73基因沉默后,细胞增殖受到抑制和诱导凋亡细胞增多。通过进一步联合自噬调节药物,结果显示3-MA和雷帕霉素均可显著影响细胞自噬的水平。其中3-MA抑制了自噬,同时进一步显著影响了Hep G2细胞的增殖活力和凋亡水平(P0.05),而雷帕霉素对于上述的指标未见明显的影响。结论GP73基因沉默可诱导Hep G2细胞株产生较高水平的自噬,而自噬的抑制可能会进一步影响Hep G2细胞的活力和凋亡水平。
【关键词】：高尔基体糖蛋白73 GP73 siRNA 自噬 Hep G2
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 第一章 前言6-10
• 第二章 材料与方法10-20
• 1 实验对象和试剂10-12
• 2 实验设备及材料12-13
• 3 实验地点13
• 4 实验步骤13-18
• 5 实验分组18
• 6 技术路线18-19
• 7 统计分析19-20
• 第三章 结果20-28
• 1 转染条件摸索和优化20-21
• 2 转染效率鉴定21-23
• 3 MDC染色自噬体23
• 4 RT-PCR检测细胞内Beclin 1 水平23-24
• 5 MTT检测细胞活力变化24-26
• 6 流式PI-FITC双染检测凋亡情况26-28
• 第四章 讨论28-33
• 第五章 结论33-34
• 参考文献34-39
• 在学期间的研究成果39-40
• 缩略词表40-41
• 致谢41

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