松墨天牛Mfe2基因的克

发布时间：2020-06-19 02:19

【摘要】：Mfe2为过氧化物酶体多功能酶类型 2(peroxisomal multifunctional enzyme type 2)基因,在脂肪酸的β氧化中起到了极其重要的作用。本研究旨在获得和鉴定松墨天牛Monochamus alternatus的Mfe2基因,并原核表达其目的蛋白,分析其在不同虫态和成虫不同组织中的表达模式。1.在载体与目的片段之间,采用具有重叠区引物的快速克隆方法克隆到松墨天牛Mfe2基因,并命名为MaMfe2(GenBank登录号:MF944109),其ORF序列全长为2 148 bp,编码716个氨基酸,预测分子量大小为77.56 kD。2.对克隆所得序列进行生物信息学分析,结果显示它与光肩星天牛Anoplophora glabripennis过氧化物酶体多功能酶2氨基酸序列一致性最高(为91%),存在AICARFT IMPCHas保守结构域序列。IPTG诱导大肠杆菌原核表达,并以Western blot结果验证Mfe2蛋白的成功表达,Western blot检测显示大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中MaMfe2表达的蛋白与松墨天牛组织内的Mfe2蛋白均与抗体有特异性结合。3.使用RT-qPCR技术分析这一基因在天牛不同虫态和成虫不同组织中的表达谱。发育表达谱结果表明,MaMfe2在松墨天牛蛹期表达量最高,在卵和幼虫期表达量较低;组织表达谱结果表明,在成虫不同组织中,MaMfe2在脂肪体中表达量最高,在前胸中表达量最低。综上所述,MaMfe2(松墨天牛Mfe2基因)编码过氧化物酶体多功能酶,在不同虫态和成虫组织中存在差异表达。本研究为进一步探究该基因在松墨天牛中的功能奠定了基础。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S763.38
【图文】：

图１不同物种的比较（Ｔａｔｕｅｔａｌ．，２０１丨）逦Ｆｉｇ．邋１邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ邋ＭＦＥ－２ｓ邋ｆｒｏｍ邋ｖａｒｉｏｕｓ邋ｓｐｅｃｉｅｓ．邋（Ｔａｔｕ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０１黑色代表３Ｒ－羟烷基辅酶Ａ脱氢酶结构域，垂直黑线条代表２Ｅ－烯酰辅酶Ａ水合构域，白色代表ＳＣＰ－２Ｌ结构域。逡逑

图４．１邋Ｍｆｅ２蛋白的二级结构预测逡逑Ｆｉｇ．４．１邋Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ邋ｓｅｃｏｎｄａｒｙ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋Ｍｆｅ２逡逑图４．２邋Ｍｆｅ２蛋白的三级结构预测逡逑Ｆｉｇ．４．２邋Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ邋３Ｄ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋Ｍｆｅ２逡逑２２逡逑

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本文编号：2720172