鸡POSTN和PDGFRL基因在卵泡中的表达及其与产蛋性状关联分析

发布时间：2020-06-30 18:52

【摘要】：Periostin(POTSN),中文名为骨膜蛋白,之前又被称之为成骨细胞特异性因子2。POSTN最初从小鼠的成骨细胞克隆中得到,其参与细胞的募集、黏附和迁移等过程,是生物体中重要的细胞生长因子。近来有研究显示,POSTN在人卵巢中有较高的表达量,其对卵泡发育的调控起到一定的作用。Platelet-derived growth factor receptor-like(PDGFRL),因其所编码的蛋白质与PDGFR-β亚基的胞外结构域显著相似,故称为血小板衍生生长因子受体样蛋白。PDGFRL已被证实为肿瘤抑制基因,参与PDGF信号通路的调控网络。本文主要以150日龄海兰褐蛋鸡为供试材料,采用半定量RT-PCR、免疫组化实验技术分别从mRNA水平和蛋白质水平探究POSTN和PDGFRL基因在鸡卵泡发育过程中的时空表达规律。并利用PCR-SSCP技术筛选大骨鸡种群中两个基因里与产蛋性状关联的潜在SNPs,以此期望发现与产蛋性能关联的重要分子标记。本研究的主要实验结果如下:(1)半定量RT-PCR实验实验结果显示:鸡POSTN和PDGFRL基因mRNA在150日龄海兰褐蛋鸡各等级卵泡及卵巢间质中均有较高水平的表达,且表达水平有一定差异。POSTN基因在直径为5-6 mm的前等级卵泡中表达量水平显著高于F1(P㩳0.05),其他各等级卵泡间差异不显著(P0.05)。这说明鸡POSTN基因主要在鸡前等级卵泡的发育调控中起一定的作用,并且随着卵泡等级分化表达量逐渐下降。而鸡PDGFRL基因表达量水平随着卵泡的发育先升高后下降,且在靠近卵泡等级化前后时期表达水平相对较高。其中,在F5中的表达量显著高于卵巢间质、4-5 mm、6-7 mm、F4、F2、F1(P㩳0.05),其他各等级卵泡间差异不显著(P0.05)。这表明鸡PDGFRL基因可能参与卵泡等级化发育生长的调节,并且可能参与卵泡等级化的维持。(2)免疫组化实验结果显示:POSTN和PDGFRL蛋白质分子主要在150日龄海兰褐蛋鸡直径小于4 mm前等级卵泡的卵母细胞和间质细胞中表达,而在膜层细胞中不表达。随着卵泡的增大,POSTN蛋白质在颗粒细胞中可以检测到阳性信号,而PDGFRL蛋白质分子在颗粒细胞细胞质中检测到微弱的阳性信号。此结果说明,鸡POSTN和PDGFRL蛋白质可能以自分泌或旁分泌的方式参与卵泡的生长发育调控。(3)PCR-SSCP实验并关联性状分析结果显示:在POSTN基因intron2上检测到A2727T的转换,根据该SNP位点,将360只大骨鸡分为AA和AB两种基因型。其中AA型母鸡在43、57和66周龄的产蛋量以及在30周龄时的蛋重都显著高于AB型(P㩳0.05),且该SNP位点在这四个产蛋性状中的加性遗传方差百分比也相对较高。在PDGFRL基因exon2上检测到G6761A和A6839G两个关联的SNPs的转换。根据PDGFRL两个关联的SNPs,将样本划分为TT、TC和CC三种基因型。其中TT型母鸡在57和66周龄的产蛋量显著高于CC型的个体(P㩳0.05),而CC型的母鸡在30和43周龄的体重和蛋重均显著高于其他两种基因型的个体(P㩳0.05),且这两个关联的SNP位点在这些产蛋性状中的加性遗传方差百分比也相对较高。根据所发现的3个SNPs组合可以得到5种基因型,其中AATT型母鸡在43和66周龄时的产蛋量显著高于其他四种基因型(P㩳0.05),并且AATT型母鸡在30周龄的蛋重显著高于其他四种基因型(P㩳0.05)。在今后的蛋鸡育种工作中,此研究结果中所发现的3个SNPs可作为一个潜在的分子标记应用于产蛋性能的遗传改良。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831

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