ING3基因对胃癌MGC-803细胞的抗肿瘤效应研究

发布时间：2020-06-30 23:31

【摘要】：目的研究生长抑制因子3(the inhibitor of growth 3,ING3)基因对胃癌MGC-803细胞的抗肿瘤效应及其初步分子机制。方法胃癌MGC-803细胞稳定转染p EGFP-N1-ING3真核表达载体和p EGFP-N1空载体,荧光显微镜检测其荧光蛋白表达,Western Blotting法和Real-Time PCR法筛选出ING3高表达的细胞株。将MGC-803-ING3细胞作为实验组,MGC-803-GFP细胞作为空载体组,MGC-803细胞作为空白对照组。MTT法检测ING3对MGC-803细胞增殖的影响,流式细胞术检测ING3对MGC-803细胞周期和细胞凋亡率的改变情况;划痕和Transwell实验检测ING3对MGC-803细胞迁移和侵袭能力的改变情况;Real-Time PCR和Western Blotting法检测相关基因m RNA和蛋白的表达情况。结果1、胃癌细胞MGC-803经稳转并筛选得到稳定高表达的绿色荧光蛋白标记ING3的MGC-803细胞株。2、MTT实验结果提示,与空白对照组和空载体组比较,ING3高表达组能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖(P0.05)。3、细胞周期和凋亡实验结果显示,与空白对照组和空载体组比较,ING3高表达组细胞周期G1期百分比率升高,细胞凋亡率增加(P0.05)。4、细胞划痕实验和Transwell实验结果提示,与空白对照组和空载体组比较,ING3高表达组能够抑制胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭(P0.05)。5、Western Blotting实验结果显示ING3高表达组细胞中p53、p21、BAX和caspase-3的蛋白表达水平增加,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平降低;Real-Time PCR实验揭示ING3高表达组细胞中p53、p21、BAX和caspase-3的m RNA表达水平增加,cyclin D1和CDK4的m RNA表达水平降低(P0.05)。结论ING3基因与胃癌的发生和转移密切相关,ING3过表达能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖,导致细胞G1期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移与侵袭,其机制可能是通过p53蛋白依赖途径来调控的,可作为胃癌基因治疗的分子靶标。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2
【图文】：

图1 ING3过表达细胞株的筛选：ING3转染MGC-803细胞单克隆筛选（A，荧光显微镜下观察ING3单克隆Western Blotting法检测细胞蛋白水平上ING3的表达；C，Real-Time PC平上ING3的表达，＊P<0.05 vs 空白对照组和空载体组）NG3 对胃癌 MGC-803 细胞增殖的影响 48h 时间点，ING3 组细胞增殖率明显低于空白对照组和空载体组表明 ING3 过表达能够抑制胃癌 MGC-803 细胞的增殖。

图1 ING3过表达细胞株的筛选G3转染MGC-803细胞单克隆筛选（A，荧光显微镜下观察ING3单ern Blotting法检测细胞蛋白水平上ING3的表达；C，Real-TimING3的表达，＊P<0.05 vs 空白对照组和空载体组） 对胃癌 MGC-803 细胞增殖的影响 时间点，ING3 组细胞增殖率明显低于空白对照组和空载体 ING3 过表达能够抑制胃癌 MGC-803 细胞的增殖。

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本文编号：2735972