广西BmNPV病毒株hr5序列和gp64基因遗传多态性分析

发布时间：2020-08-03 18:31

【摘要】：家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)可引发家蚕血液型脓病,给蚕业带来严重损失。同时,BmNPV也作为良好的外源基因表达材料应用于现代医学研究和生物技术等方面。BmNPV同源重复区hrs可以作为该病毒基因组复制的起点,并且能够作为增强子增强基因的表达效率,对BmNPV的增殖有着密切的关联。囊膜糖蛋白GP64可识别细胞膜表面的受体,是病毒入侵宿主细胞所需的重要结构,对病毒在宿主体内的传播具有关键性作用。本研究通过对采集自广西各蚕区的家蚕血液型脓病样本,进行BmNPV多角体的纯化,提取其BmNPV病毒株的全基因组,并对基因组的同源重复区hr5和囊膜糖蛋白gp64基因进行克隆,经过测序和序列分析,结果显示:1.本试验通过对19株广西BmNPV病毒株hr5进行克隆分析,结果发现广西BmNPV病毒株的hr5核苷酸序列出现不同程度的变异,表现在由大片段的缺失和插入造成序列长度差别较大。这种差别不仅出现在不同毒株之间,而且同一毒株两个目的序列也不尽相同。19个供试毒株的hr5大小在165-999 bp之间,其中,有10个毒株分别扩增出两个不同长度的/hr5,有2个毒株出现了整个同源重复序列的缺失,其他毒株也存在不同程度的回文片段缺失或增加。以此认定hr5并非病毒复制的必需因子,但hrs不同的回文序列之间存在功能补偿或相互替代作用,使病毒不仅能保持其基因的稳定性,更能维持其对新环境适应性能,这就是病毒在新老环境下皆能得以为继与不断适应与生存的意义所在。2.通过对供试的18个BmNPV病毒株gp64基因的克隆。结果发现,其中有2个毒株与T3株gp64基因ORF的长度一致,有2个毒株的gp64基因ORF在94-96位有3个核苷酸的缺失,有10个毒株的gp64基因ORF在97-102位上有6个核苷酸的插入。该突变位点位于GP64蛋白的N端信号肽序列,所缺失和插入的氨基酸均为疏水性氨基酸,该突变对相应区域结构或功能是否有影响还有待进一步深入研究。3.依据与BmNPV病毒株gp64 ORF构建的遗传进化树比较,结果显示区内各分离毒株与国外的毒株不在同一亚群,说明gp64基因的遗传具有地域特点。4.通过对供试BmNPV病毒株的gp64基因和hr5序列核苷酸序列同源性对比,发现gp64基因序列间的同源性在97.5%以上,而hr5序列的核苷酸同源性仅在66%以上。从此可以认定结构蛋白基因gp64更具保守性,而基因间区序列hr5则不然。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S884.51
【图文】：

歹丨删亍邋ＰＣＲ邋扩增时发现，ＧＸＨＪ、ＧＸＪＸ、ＧＸＬＹ、ＧＸＬＣ、ＧＸＮＭ、ＧＸＰＢ、ＧＸＸＤ、逡逑ＧＸＹＦ、ＧＸＹＪ和ＧＸＺＳ出现了两个不同长度的片段，对两个片段进行克隆测序，逡逑它们的核苷酸序列皆符合同源重复区的特征。如图３－３（Ａ）表示ＧＸＴＹ、ＣＸＣＷ、逡逑ＧＸＹＺ１、ＧＸＺＰ、ＧＸＲＸ、ＧＸＭＳ２的扩增目的序列大小，图３－３（Ｂ）表示ＧＸＬＹ逡逑株在扩增时出现两条目的条带。逡逑２２逡逑

对目的条带进行纯化后进行序列克隆，对抽提的克隆质粒进行ＰＣＲ扩增后，逡逑初步鉴定目的条带成功得到克隆，并对质粒进行双酶切鉴定，最终确定了阳性克逡逑隆，如图３－４表示ＧＸＬｅＹ－１和ＧＸＬｅＹ－２邋／Ｖ邋Ｉ邋／价ｍ／／邋Ｉ双酶切电泳检测图。逡逑２３逡逑

分析ＢｍＮＰＶ病毒株各ＡｒＪ序列同源性，发现只有ＧＸＺＳ－１和ＧＸＮＮ、逡逑ＧＸＮＭ－１和ＧＸＺＰ、ＧＸＮＭ－２和ＧＸＴＹ之间的同源性达到了邋１００％，其他序列间逡逑的同源性在５２．５％以上。

【参考文献】

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本文编号：2780033