慢病毒介导的ADAM17基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

发布时间：2020-08-15 14:27

【摘要】：目的通过慢病毒介导,使乳腺癌MCF-7细胞的ADAM17基因过表达,观察MCF-7细胞增殖能力的变化。方法常规培养人乳腺癌细胞MCF-7,实验分为三组:空白对照组(常规培养的细胞)、转染对照组(转染慢病毒空白载体)、转染组(转染ADAM17过表达慢病毒)。转染96h后,利用倒置荧光显微镜观察转染效率。转染成功后,Real-time PCR法检测各组细胞ADAM17mRNA的表达,Western blot法检测各组细胞ADAM17蛋白的表达。应用MTT法检测各组细胞的增殖情况,应用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,应用免疫细胞化学法检测各组细胞中Ki67蛋白的表达。结果1按照病毒转染说明,MOI=100,成功将ADAM17过表达慢病毒(LV8N-ADAM17)转染入MCF-7细胞中,且转染效率约为100%。2 Real-time PCR法检测各组MCF-7细胞ADAM17mRNA的表达,空白对照组、转染对照组、转染组ADAM17 mRNA的相对表达量为1.03±0.14、1.18±0.10、1.81±0.06,转染组的ADAM17 mRNA水平显著高于空白对照组和转染对照组,差异有统计学意义(P0.05),而转染对照组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。3 Western blot法检测各组MCF-7细胞ADAM17蛋白OD值,空白对照组、转染对照组、转染组ADAM17蛋白的OD值为0.518±0.066、0.544±0.059、0.866±0.083。转染组的ADAM17蛋白表达明显高于空白对照组和转染对照组,差异有统计学意义(P0.05)。而转染对照组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。4 MTT结果显示:转染组在转染后24、48和72h,OD值分别是0.328±0.008、0.702±0.026、1.166±0.051。在24、48和72h这三个时间点,转染组与空白对照组、转染对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);而转染对照组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。5流式细胞术检测细胞周期结果显示:转染组与空白对照组相比较,静止期(G0/G1期)细胞所占比例显著下降,而增殖期(S期)细胞的比例显著增多,差异有统计学意义(P0.05),提示转染组的细胞增殖活跃。而转染对照组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。6免疫细胞化学染色法检测各组细胞中Ki67蛋白的表达,空白对照组、转染对照组、转染组的染色指数评分分别为6.01±0.77、6.72±0.53、8.29±0.48。与空白对照组、转染对照组相比,转染组的染色指数显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。而阴性对照组与空白对照组之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论通过慢病毒介导的ADAM17基因过表达,能使乳腺癌MCF-7细胞增殖力增强。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

图 2 ADAM17 扩增曲线及熔解曲线Fig.2 The amplification curve and dissociation curve of ADAM17图 3 β-actin 扩增曲线及熔解曲线Fig.3 The amplification curve and dissociation curve of β-actin

图 3 β-actin 扩增曲线及熔解曲线Fig.3 The amplification curve and dissociation curve of β-actin注：*与空白对照组、转染对照组比较 P<0.05。图 4 ADAM17 mRNA 在各组中的表达（n=5, x—±s）

ADAM17mRNA在各组中的表达（n=5,x—±s）

【参考文献】

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