miR-21靶向调节MARCKS基因影响人三阴性乳腺癌细胞多西紫杉醇敏感性的研究

发布时间：2020-08-21 17:43

【摘要】：目的以三阴性乳腺癌亲代敏感细胞(MDA-MB-231/S)及其同系构建的多西紫杉醇耐药细胞(Docetaxel,Doc;MDA-MB-231/Doc)为研究对象,探讨 miR-21(MicroRNA-21,miR-21)对MARCKS基因表达的调控及其与乳腺癌MDA-MB-231细胞株多西紫杉醇耐药的潜在关系,为乳腺癌耐药逆转治疗寻找靶点。方法通过基因芯片筛选到miR-21在亲代敏感细胞株(MDA-MB-231/S)与多西紫杉醇耐药细胞株(MDA-MB-231/Doc)中存在差异表达,并经实时荧光定量(RT-qPCR)方法获得验证;分别合成miR-21模拟物(mimics)和抑制物(inhibitors),经转染对上述敏感和耐药细胞进行干预性试验研究,观察这些细胞受干预后miR-21表达及其药物敏感性的变化;通过靶基因预测软件预测miR-21的靶基因,分析miR-21与MARCKS基因的靶向关系;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、RT-qPCR和蛋白质印迹法验证miR-21表达水平的变化通过靶向MARCKS基因对三阴性乳腺癌细胞多西紫杉醇耐药性的影响。结果1、miRNA芯片分析表明,与MDA-MB-231/S相比,miR-21在MDA-MB-231/Doc中的表达水平明显升高,差异为(2.03±0.06)倍(P0.05)。2、与阴性对照组相比,敏感细胞(MDA-MB-231/S)转染miR-21 mimics后miR-21表达水平明显增高(22.26±0.07)倍(P0.05),同时转染细胞表现为IC50(导致50%细胞死亡的Doc药物浓度)明显增加、Doc诱导的细胞凋亡率明显降低。耐药细胞(MDA-MB-231/Doc)转染 miR-21 inhibitors 后 miR-21 表达水平明显下调(是阴性对照组的0.36±0.03倍;P0.05),同时转染细胞表现为IC50明显降低、Doc诱导的细胞凋亡率明显增高。3、PicTar、TargetScan 和 miRDB 预测软件分析发现 MARCKS 为 miR-21 的特异性靶基因。进一步研究证实miR-21与MARCKS基因的表达呈负相关:转染miR-21 mimics的MDA-MB-231/S细胞中MARCKS mRNA和蛋白的表达水平明显下降,耐药性增强;转染miR-21 inhibitors的MDA-MB-231/Doc细胞中MARCKS mRNA和蛋白的表达水平明显升高,耐药性逆转。结论1、miR-21在乳腺癌耐药细胞(MDA-MB-231/Doc)中的表达明显高于其敏感细胞(MDA-MB-231/S)。2、体外导入miR-21模拟物以及抑制物后发现,miR-21表达水平与乳腺癌细胞对多西紫杉醇的耐药呈正相关,确认miR-21为耐药相关miRNAs。3、生物信息结果显示MARCKS是miR-21的特异性靶基因,miR-21与MARCKS基因的表达呈负相关。4、miR-21可能通过靶向调节MARCKS基因影响三阴性乳腺癌细胞对多西紫杉醇化疗的敏感性。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

Ｆｉｇ．ｌ邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｍｉｒ－２１邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｂｙ邋Ｄｏｃ逡逑４．５邋ｍｉＲ－２１对预测靶基因的影响逡逑ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／Ｓ转染ｍｉＲ－２１ｍｉｍｉｃｓ后，ｍｉＲ－２１表达量明显上调，结果见逡逑图２，针对ＭＡＲＣＫＳ的基因表达分析显示：其ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平均下降，逡逑分别是阴性对照的（０．３６２士０．０７６）倍和（０．３８６土０．０２０）倍（Ｐ＜０．０５）；另一方面，逡逑ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／Ｄｏｃ邋转染邋ｍｉＲ－２ｌ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ邋后，ｍｉＲ－２１邋表达量明显下调，ＭＡＲＣＫＳ逡逑基因表达分析显示：其ｍＲＮＡ和蛋白的表达均明显上调，分别是阴性对照组的逡逑（３．５６４士０．３３６）倍和（２．０１９士０．２６８）倍（Ｐ＜０．０５）；阴性对照和空白对照组间均无差异逡逑（？＞０．０５）。通过预测分析，抑癌基因ＭＡＲＣＫＳ可能为ｍｉＲ－２１的特异性靶基因。逡逑

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本文编号：2799667