毛花猕猴桃PR2蛋白基因的克隆及其对猕猴桃溃疡病菌的响应

发布时间：2020-08-22 19:17

【摘要】：猕猴桃细菌性溃疡病是由丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidae,PSA)引起的毁灭性的细菌性病害,严重影响了猕猴桃的品质和产量,给世界猕猴桃产业带来了严重的经济损失。目前,猕猴桃溃疡病还是以化学防治为主,然而大量化学农药的使用又会影响猕猴桃产品的品质和安全。因此,培育抗病品种成为一种减轻猕猴桃溃疡病危害的有效手段。而与传统育种相比,转基因抗病育种可将特定的抗病基因转入猕猴桃,对其进行遗传改良,从而可大大缩短育种年限,加快抗病育种进程。本研究以毛花猕猴桃叶片为试验材料,从前期筛选到的可能具有抗溃疡病功能的PR2蛋白基因入手,对其进行克隆,并对该基因进行了亚细胞定位及抗溃疡病功能鉴定,旨在为猕猴桃转基因抗病育种提供可靠的基因资源和分子依据。研究结果如下:(1)成功克隆了毛花猕猴桃中的PR2蛋白基因,该基因全长732bp,含有732bp的完整开放阅读框,共编码243个氨基酸。(2)构建了融合蛋白表达载体35S:PR2-GFP,并通过冻融法成功将其转化至根癌农杆菌感受态细胞GV3101。(3)成功将35S:GFP空载对照和35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体瞬时转化到“本氏”烟草中,并对瞬转烟草叶片进行亚细胞定位分析及抗溃疡病功能鉴定。亚细胞定位结果表明PR2蛋白基因定位于细胞核及细胞质。抗溃疡病功能鉴定结果表明转入35S:GFP空载对照的烟草叶片接种PSA后出现过敏反应,而转入35S:PR2-GFP融合蛋白表达载体的则无症状或症状较轻,证实了该基因具有一定的抗溃疡病功能。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S436.634.1
【图文】：

毛花猕猴桃,琼脂糖凝胶电泳,猕猴桃,污染物

花猕猴桃总 RNA 琼脂糖凝胶电泳图trophoresis of total RNA of Actinidia er对所提取的猕猴桃总 RNA 进行同时用 Nano Drop2000 检测其质260/OD280=1.96 ，OD260/OD230=2 处测定蛋白、盐及溶剂的含量。因的总 RNA 中的污染物较少。通D260/OD230大于或等于 1.8。这表。

电泳图,猕猴桃,蛋白基因,PCR扩增产物

花猕猴桃总 RNA 琼脂rophoresis of total RNA 对所提取的猕猴桃同时用 Nano Drop20260/OD280=1.96 ，O 处测定蛋白、盐及溶总 RNA 中的污染D260/OD230大于或等

序列,菌液,重组质粒,PCR检测

R2 /pMD19T 重组质粒的鉴定 PR2/pMD19T 重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞 DH5α 中，挑取单菌行菌液 PCR 检测，检测结果如图 3-3 所示。目的片段加上 pMD19T（s部分片段大小约为 900bp，将菌液 PCR 检测结果正确的菌液送去测序。Kiwifruit Genome Datebase 中已登录的红阳的 PR2 蛋白基因序列进行比对性达为 93.17%，这可能是同种基因在不同品种中存在差异所致，可用

【参考文献】