对虾白斑综合症病毒极早期基因wsv249启动子分析及转录因子CREB-3鉴定

发布时间：2020-09-11 08:43

　　 自被发现以来,由于对虾白斑综合症病毒(WSSV)的高传染性,高死亡率,此病毒成为了危害虾类养殖业的主要病原之一,并严重影响了对虾产业的发展。由于WSSV感染宿主的关键步骤之一是其极早期基因的转录与翻译,因此本文着重分析了 WSSV极早期基因wsv249启动子及其有关转录因子之间的联系。WSSV极早期基因wsv249编码了一种E3泛素连接酶,能够与对虾体内的泛素结合酶相互作用。本研究中,为了了解wsv249转录调节机制,将wsv249启动子序列以25 bp为单位截短,并分析其启动子活性。四个25 bp区域被认为是潜在的正向或逆向调控元件。值得注意的是,将启动子CRE元件(-275/-250)截去,启动子活性受到抑制而降低了 84.2%。CRE元件是环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREBs)和激活蛋白1(AP-1)的结合位点。为此,本文深入研究了对虾体内同源蛋白Lvc-Jun和LvCREB-3对wsv249启动子的调控作用。我们通过(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内发现了一种CREB同源蛋白LvCREB-3,并且LvCREB-3蛋白在鳃组织中分布最多,而在心脏中含量最少。通过WSSV感染实验,发现在病毒感染12-24小时之间,LvCREB-3基因表达量在对虾鳃组织中迅速上升。这一时间段刚好与WSSV病毒极早期基因的表达相对应。另外,Lvc-Jun能够上调wsv249启动子活性高达12.4倍。EMSA实验证明Lvc-Jun能够与启动子中CRE序列结合。双荧光素酶报告基因检测证明位于wsv249启动子序列中-212/-205bp位置的CRE位点而不是-256/-249bp位置的CRE位点,在启动子活性方面起关键作用。相反,对虾体内LvCREB-3蛋白并不能激活wsv249启动子活性。上述研究有助于了解WSSV病毒与宿主体内因子的相互关系,同时也能够帮助了解病毒感染初期,其极早期基因在宿主体内的转录调控,为将来病毒防治提供理论依据。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S945.4
【部分图文】：

ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反转录酶合成完整的ｃＤＮＡ。当ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反转录酶到达提取逡逑的ＲＮＡ５’末端时，其末端转录酶活性能够在ｃＤＮＡ的第一链的３’末端加上额外逡逑的核苷酸（如图２－１）。逡逑Ｐｏｌｙ邋ＲＮＡ逡逑５邋ｖ＼／ｗｗｘ／ｗｖ＼／ｖ邋ｐｏｌｙＡ邋３‘逡逑５邋＾１－逦Ｏｌｉｇｏ邋（ｄＴ）邋ｐｒｉｍｅｒ逡逑ＳＭＡＲＴｅｒ邋ＩＩＡ逦Ｆｉｒｓｔ－ｓｔｒａｎｄ邋ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ逡逑Ｏ＾ｏｎｕｄｅＤｔｉｄｅ逦ｃｏｕｐｌｅｄ邋ｗｉｔｈ逡逑ｔａｉｌｉｎｇ邋ｂｙ逡逑ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑Ｙ逡逑义＞0０0＾逦＿Ａ逡逑Ｓ＇逦〕逡逑Ｔｅｍｐｌａｔｅ邋ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ逡逑ａｎｄ邋ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ邋ｂｙ逡逑ｙ邋ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑５—ＸＸＸＸＸ逦ｐｏｌｙＡ逡逑—ＸＸＸＸＸ邋逦逡逑图２－１邋ｃＤＮＡ合成示意图逡逑２６逡逑

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第一部分对虾ＷＳＳＶ极早期基因ＷＷ２４９启动子序列分析及其转录因子基因预测逡逑出１．７７倍；Ｐ２４９（－２００／－ｌ）活性比Ｐ２４９（－１７５／－ｌ）活性要高出１．６２倍。通过上述实验，逡逑我们推断在ｍｖ２办启动子的－１７５到－２００邋ｂｐ之间的区域存在一个正调控元件，在逡逑－２５０到－２２５邋ｂｐ之间的区域存在一些负调控元件（图３－１邋）。逡逑

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 冉晓卓;李钫;;对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究进展[J];生物技术通报;2014年08期

2 余云军;于会国;;世界对虾养殖业的发展现状与发展趋势[J];世界农业;2007年05期

3 闫冬春;;防治对虾白斑综合征病毒(WSSV)的主要措施[J];水产科学;2006年04期

4 崔禾;;纵观全球养殖对虾产业现状 分析我国对虾产业发展趋势(连载一)[J];中国水产;2006年04期

5 邓灯,刘萍,孔杰;卤虫在WSSV病毒病传播中的媒介作用[J];海洋水产研究;2004年05期

6 肖培弘;中国对虾暴发性流行病防治的新见解[J];渔业致富指南;2004年20期

7 江世贵,翁少萍,吕玲,苏天风,何建国;对感染白斑综合症病毒的亲虾子代的跟踪检测[J];中山大学学报(自然科学版);2003年01期

8 吕玲,何建国,邓敏,翁少萍,左涛;核酸探针原位杂交检测白斑综合症病毒的组织特异性[J];热带海洋;2000年04期

9 何建国,莫福;对虾高位池养殖模式及其与病害控制的关系[J];中国水产;1998年12期

10 何建国,莫福;对虾白斑综合症控制与广东省对虾养殖业持续发展[J];中国水产;1998年11期

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1 史晏如;罗氏沼虾IMD信号通路关键基因（Relish、IMD）的克隆和功能研究[D];南京师范大学;2016年

2 余云军;对虾养殖业的可持续发展研究[D];中国海洋大学;2006年

本文编号：2816461