阿尔茨海默病风险基因的甲基化水平研究

发布时间：2020-10-09 14:04

　　目的:探索外周血中AD潜在的风险基因(APOE、BAX、OGG1、PLAU和A2M)的甲基化水平与阿尔茨海默病(AD)的相关性。分析阳性候选基因BAX、PLAU作为生物标志物对AD的诊断价值。对比浙江汉族人群和新疆汉族人群之间的甲基化水平差异,进一步探讨基因甲基化水平是否受环境因素影响而存在地域差异。方法:从宁波市某三甲医院收集AD病例53例,同时收集年龄匹配且无痴呆家族史的正常对照54例,使用磁珠法提取基因组DNA,通过亚硫酸氢盐转化后,运用实时荧光定量PCR的方法检测APOE、BAX、OGG1、PLAU和A2M基因启动子区域的Cp G岛甲基化水平,运用统计学方法分析5个候选基因的甲基化水平与AD的相关性。并将浙江地区这53例AD、54例对照的研究结果与新疆地区17例AD、34例对照做地域间的甲基化水平比较,分析环境因素对甲基化修饰的影响。结果:AD组相对于对照组表现出高APOE e4基因携带(P=3.75E-04)。BAX和PLAU基因低甲基化水平与AD存在关联(BAX:P=3.49E-07,PLAU:P=0.018)。按性别分层后,BAX在男性AD、女性AD患者中均呈现低甲基化状态(P male=2.88E-05,P female=0.001);而PLAU和OGG1显示出男性AD特异性甲基化降低(P=4.961E-02,P=4.025E-04)。ROC曲线分析得出:BAX和PLAU甲基化对于AD均有一定的诊断价值,且BAX诊断AD的效果优于PLAU(BAX:AUC=0.786,灵敏度=0.66,特异度=0.83,P=5.88E-07;PLAU:AUC=0.615,灵敏度=0.42,特异度=0.906,P=0.044)。新疆地区汉族人群APOE和BAX甲基化水平低于浙江汉族人群,按年龄、性别、APOE e4基因携带与否调整分析后,差异依然具有统计学意义(APOE:AD组,P=0.006,P调整=0.003;对照组,P=2.44E-14,P调整=0.002;BAX:AD组,P=1.58E-08,P调整=0.015;对照组,P=2.70E-14,P调整=0.001)。在AD组中,新疆地区的人群OGG1的甲基化水平低于浙江地区的人群(P=5.97E-05);但在对照组中,新疆地区OGG1的甲基化水平高于浙江地区,按年龄、性别、APOE e4基因携带与否调整分析后,差异依然具有统计学意义(P=4.59E-15,P调整=0.002)。结论:BAX和PLAU低甲基化是AD的风险因素。外周血中BAX和PLAU低甲基化可作为AD的潜在诊断生物标志物,且BAX对AD的诊断价值优于PLAU。APOE、BAX、OGG1甲基化地域差异印证了环境因素对甲基化修饰的影响。BAX和PLAU在AD疾病进展过程中的表观遗传修饰机制有待进一步研究。
【学位单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749.16
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
1.研究内容与方法
    1.1 研究对象
        1.1.1 浙江地区样本来源
            1.1.1.1 病例和对照的选择
            1.1.1.2 诊断标准和排除标准
        1.1.2 新疆地区样本来源
    1.2 研究材料与方法
        1.2.1 实验仪器
        1.2.2 实验试剂
        1.2.3 外周血DNA提取
        1.2.4 APOE基因分型测定
            1.2.4.1 PCR扩增目的片段
            1.2.4.2 APOE基因分型
        1.2.5 DNA甲基化水平测定
            1.2.5.1 筛选AD相关甲基化修饰敏感基因
            1.2.5.2 引物设计
            1.2.5.3 亚硫酸氢盐转化
            1.2.5.4 实时荧光定量甲基化特异PCR
    1.3 统计方法
    1.4 技术路线
2.结果
    2.1 浙江地区研究对象的基本资料
    2.2 甲基化水平与AD相关性
        2.2.1 5个基因甲基化水平与AD相关性
        2.2.2 性别、APOEe4基因型亚组研究结果
    2.3 BAX、PLAU作为AD生物标志物的诊断价值
    2.4 新疆地区研究对象的基本资料
    2.5 甲基化水平的地域性差异
3.讨论
4.结论
参考文献
附录A 综述
    参考文献（references）
在学研究成果
致谢

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