白屈菜碱对NF-κB活化及相应靶基因表达的影响

发布时间：2020-10-28 15:08

　　 目的:NF-κB是一种调控数百种基因表达的转录因子,它调控的基因涉及免疫,炎症,凋亡,增殖等。白屈菜碱为苯并菲啶类生物碱,是在筛选NF-κB抑制剂时,发现的的一种源自天然产物并且有效的小分子抑制剂。据报道它具有抗炎的药理学活性。然而,其抗炎的分子机制尚不清楚。所以,我们研究了白屈菜碱对NF-λB活化的影响。方法:①使用MTT实验检测白屈菜碱对HCT116细胞存活率的影响;②使用荧光素酶报告基因实验检测白屈菜碱对TNF-αa诱导的NF-1κB转录活性的影响;③使用蛋白免疫印迹法检测白屈菜碱对TNF-α诱导的NF-κB和MAPK信号通路及靶蛋白表达的影响;④使用RT-PCR和rael-timePCR实验检测白屈菜碱对TNF-α诱导的iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表达水平的影响;⑤使用免疫荧光实验探测HCT116细胞中白屈菜碱对TNF-α诱导的p65的核定位情况的影响;⑥使用流式细胞术检测白屈菜碱对TNF-α诱导的细胞凋亡的影响。⑦EdU实验、细胞集落实验用于检测HCT116细胞中白屈菜碱对TNF-α诱导的细胞增殖的影响。结果:1.白屈菜碱抑制TNF-α诱导的NF-κB的转录活性并其不是由于细胞毒性引起的。2.白屈菜碱剂量性的抑制TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和降解及p65的核转移,同时也抑制NF-κB靶基因的表达。3.白屈菜碱剂量性抑制TNF-α诱导的p-p38和p-JNK的表达。尽管PDTC(100 μM)也可以抑制TNF-α诱导的p-p38和p-JNK的表达,并对p-ERK没有明显影响。但是白屈菜碱可以更好的抑制p-p38的表达。4.白屈菜碱剂量性抑制iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表达水平并且抑制与细胞凋亡和增殖有关的NF-κB下游靶蛋白的表达。5.白屈菜碱促进TNF-α诱导的细胞凋亡。6.细胞集落实验和EdU实验证明白屈菜碱抑制HCT116细胞的增殖。结论:白屈菜碱抑制TNF-α诱导的NF-κB的转录活性并抑制与细胞凋亡、增殖、炎性因子相关的蛋白质和mRNA的表达;白屈菜碱能够促进TNF-α诱导的细胞凋亡。这些结果表明,白屈菜碱可能成为治疗炎性疾病的潜在药物。
【学位单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：

ｍＣ?ｍｍｍｍｒｎ?Ｔ?￣ｉ?Ｑ??图１－２?ＩｋＢ结构示意图??１．１．３?ＩＫＫ复合物??ＩＫＫｃｔ，?ＩＫＫｐ和ＮＥＭＯ组成ＩＫＫ激酶复合物。重组ＮＥＭＯ与ＩＫＫａ或??ＩＫＫｐ组装成复合物，其表观分子量与纯化复合物相似［３６，３７］。ＩＫＫａ在非经典信??号传导途径中是必要的然而在经典信号传导途径中并不是必要的［３８，３９］。ＩＫＫａ在??所有途径中都不需要降解，但ＩＫＫａ在ＮＦ－ｋＢ依赖性基因表达的经典信号传导??途径中起重要作用。ＮＥＭＯ在经典的ＮＦ－ｋＢ的信号传导途径中是必需的，并??且ＮＥＭＯ缺陷的小鼠死于大量肝细胞凋亡的胚胎中。与ＩＫＫ（３敲除细胞相比，??ＮＥＭＯ缺陷型细胞表现出更严重和更广泛的ＮＦ－ｋＢ活化损失，表明一些典型??信号途径中缺乏ＩＫＫＰ也是完整的％

图１－２?ＩｋＢ结构示意图??１．１．３?ＩＫＫ

位论文?白屈菜碱ＮＦ－ｋＢ活化及相应靶第三章结果??菜碱抑制ＮＦ－ｋＢ的转录活性??宄白屈菜碱对ＴＮＦ－ａ诱导的ＮＦ－ｋＢ转录活性的影响，因实验。将ＮＦ－ｋＢ调节的萤光素酶报告基因载体转染白屈菜碱与ＴＮＦ－ｃｔ共同处理细胞。结果显示，白屈菜抑制报告基因的表达，并且在ＴＮＦ－ａ刺激下，白屈菜ＮＦ－ｋＢ抑制剂，１００?ｐＭ）抑制ＮＦ－ｋＢ报告基因表达＂７???
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 Sakineh Kazemi Noureini;Michael Wink;;Transcriptional down regulation of hTERT and senescence induction in HepG2 cells by chelidonine[J];World Journal of Gastroenterology;2009年29期

本文编号：2860254