醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞ER、PR、c-fos、Dnmt1基因蛋白表达的影响

发布时间：2020-11-05 18:03

　　 [目的]1.观察体外应用醋酸棉酚(GAA)对人舌鳞癌Cal-27细胞生长和凋亡的影响2.检测体外应用醋酸棉酚(GAA)对人舌鳞癌Cal-27细胞ER、PR、c-fos基因及Dnmtl蛋白表达的影响,探讨棉酚治疗肿瘤的可能机制,为临床应用棉酚治疗肿瘤提供相关实验依据和理论基础。[方法]1.体外常规状态下培养人舌鳞癌Cal-27细胞,采用不同浓度的醋酸棉酚(GAA)处理细胞,在倒置显微镜下观察不同浓度GAA处理前后的Cal-27细胞的形态学变化。2.应用CCK-8法检测在不同浓度GAA作用48h、72h前后,人舌鳞癌Cal-27细胞的生长变化情况,并分别计算出48h、72hGAA作用的IC50值。3.应用流式细胞术(FCM)检测在不同浓度的GAA分别作用48h及72h后,人舌鳞癌Cal-27细胞的凋亡情况。4.应用Western-blot技术检测在不同浓度的GAA分别作用48h、72h后,人舌鳞癌Cal-27细胞中ER、PR、c-fos以及Dnmtl基因的蛋白表达水平变化情况。[结果]1.CCK-8 检测法显示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L 浓度的GAA作用人舌鳞癌Cal-27细胞48h、72h,均能够抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的生长,且在一定范围内,抑制率随浓度以及作用时间的增加而增加。并测得48h、72h的IC5G值分别为:5.2μmol/L、3.7μmol/L。2.流式细胞仪检测结果显示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、l0.0μmol/L 浓度的 GAA 作用人舌鳞癌 Cal-27 细胞 72h后,细胞凋亡率均较对照组升高(P0.05)。3.Western-blot检测结果显示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、l0.0μmol/L 浓度的 GAA 作用人舌鳞癌 Cal-27 细胞 48h、72h后,细胞内ER、c-fos蛋白表达水平较对照组均有升高(P0.05),Dnmtl、PR蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。[结论]1、在一定范围内,GAA能够抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的生长,且抑制率具有浓度以及时间的依赖性;2、GAA能够诱导人舌鳞癌Cal-27细胞发生凋亡,在一定范围内,凋亡率随GAA浓度以及作用时间的增加而增加;3、一定浓度的GAA能够使人舌鳞癌Cal-27细胞系中的Dnmtl、PR蛋白表达水平降低,能够使ER、c-fos蛋白表达水平升高。
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.86
【部分图文】：

图１?Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ凋亡检测原理??Ｆｉｇｌ?Ｔｈｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ??２．４应用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测不同浓度ＧＡＡ作用于人舌鳞癌Ｃａｌ－２７细胞４８ｈ、７２ｈＥＲ、ＰＲ、ｃ－ｆｏｓ以及Ｄｎｍｔｌ基因蛋白水平的变化??２．?４．?１?Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验原理??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，其所检测的物质是蛋白质，抗体为“探针”，用标记的二抗来“显色”。将通过ＰＡＧＥ分离的蛋白质样品，转到硝酸纤维素薄膜上，硝酸纤维素薄膜通过非共价键的形式吸附蛋白质，并且能够保持电泳分离的蛋白质类型以及其生物学活性不变。以硝酸纤维素薄膜上蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体发生免疫反应，再与标记过的第二抗体生反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。??２．?４．?２?Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ实验材料??

图４?５．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ处理４８ｈ?４０ｘ１０?

分别培养４８ｈ、７２ｈ，在倒置显微镜下观察人舌鱗癌Ｃａｌ－２７细胞，发现细胞体积缩??小，连接消失，与周围的细胞脱离，细胞质密度增加，后期细胞死亡。并且随着??浓度的增加以及时间的延长，对细胞增殖的影响越明显。（见图２－图９）。??＾ｉ：?■?＾??图２对照组Ｃａｌ－２７细胞培养４８ｈ?４〇ｘｌ〇?图３?２．５叫１〇１／１＾＾处理４８１１?４０＞＜１０??Ｆｉｇ２?Ｃａｌ－２７?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｆｉｇ３?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?２．５?＾ｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ??＇?／?Ｖ４”?心??ｎ?＾?＾?ｈ?＾??—）??￥?－：?ｔ??Ｋｍ?—?＇ｄ??图４?５．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ处理４８ｈ?４０ｘ１０?图５?ｌａＯｐｍｏｌ／ＬＧＡＡ处理４８ｈ?４〇ｘｌ〇??Ｆｉｇ４?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?５．０｜ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｆｉｇ５?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?１０．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ??２０??
【参考文献】

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本文编号：2871997