HEXIM蛋白家族对即刻早期基因的影响

发布时间：2020-11-14 08:50

　　 转录调控在真核生物的基因表达中有着至关重要的作用。研究发现RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)可以暂停在许多基因的转录起始位点下游30-50bp处。当接受一定刺激后,正性转录延伸因子P-TEFb可磷酸化位于RNA PolⅡ碳端结构域(CTD)中7肽重复序列的2位丝氨酸(Serine 2),释放PolⅡ,激活转录,进而合成全长mRNA。HEXIM蛋白家族包括HEXIM1和HEXIM2蛋白,两者的序列具有很强的同源性,在功能上也十分相似。HEXIM家族中HEXIM1与HEXIM2蛋白可以以同源二聚体或异源二聚体的形式参与7SK snRNP的形成。7SK snRNP复合物可以通过与P-TEFb的结合抑制活性,在转录调控中主要起抑制的作用。然而,两者在转录调控中是否存在功能差异性目前尚不清楚。为了探究HEXIM家族两种蛋白在转录调控中的作用,我们首先制备了特异性的识别HEXIM1和HEXIM2的抗体。并且利用CRISPR-Cas9技术分别构建了HEXIM1和HEXIM2敲除的HCT 116稳定细胞系,用于后续实验。通过Q-PCR和Western Blot结果结果显示在RNA和蛋白水平上HEXIM1敲除后HEXIM2的表达上调;而HEXIM2敲除后HEXIM1的表达亦会上调,提示HEXIM1和HEXIM2可能存在功能上的代偿。随后进行的血清饥饿处理研究时发现HEXIM1敲除后C-FOS,C-JUN和EGR1的表达量下调,而HEXIM2敲除后C-FOS和C-JUN的表达量上调。为了进一步探究造成两者差异性的机制,我们通过ChIP实验探究在血清刺激后HEXIM蛋白敲除后对于PolⅡ和AFF4在C-FOS位点的富集情况。结果表明HEXIM1敲除后并不影响PolⅡ和AFF4的富集;而HEXIM2敲除后PolⅡ在启动子和下游基因处的富集均显著增加,而AFF4在启动子处的富集也增加。因此HEXIM1和HEXIM2在分子水平上对CFOS的调控存在功能差异性;HEXIM2可能通过影响超级延伸复合物(SEC)参与的PolⅡ重新释放的过程。然而,HEXIM1和HEXIM2的具体调控机制还需要进一步的研究。
【学位单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：Q753
【部分图文】：

端的乙酰化赖氨酸相互作用，然后通过 Cyclin T1细胞中用 BET 蛋白抑制剂处理后发现许多基因的转可以认为 BRD4 通过募集 P-TEFb 参与 PolⅡ的释放的过程如图 1所示。

SEC 的 ELL 相关蛋白 EAF1 和 EAF2 可以和中介体复合物的亚基MED26 相互作用[26]。而 SEC 的 AF9和 ENL 被证实可以与 PolⅡ相关蛋白 PAF相互作用[27]。因此认为共因子 MED26 和 PAF1 参与 SEC 的募集，从而调控基因的表达。模式图如 1.1c所示。

析发现 HEXIM1 蛋白含有 C 端的 SH3和锚定结构域（C心区域含有进化上保守的 PYNT 序列，在 PYNT 序列的列（NLS），结构如图 2.1a 所示[38]。HEXIM2 蛋白同样含构域，PYNT 序列和一个核定位序列，结构如图 2.1b 所示
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本文编号：2883291