牛ANGPTL8基因影响脂肪分化机制的初步探究

发布时间：2020-11-19 01:29

　　 血管生成素样蛋白家族(Angiopoietin-like proteins,ANGPTLs)是一类分泌型蛋白因子,参与血管生成、脂质合成、葡萄糖代谢及胰岛素敏感性等生理状况的调控。其家族成员ANGPTL8能通过抑制脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)的活性,调节血液中甘油三酯(Triglyceride,TG)含量,影响脂肪组织对甘油三酯的转运与吸收,进而影响脂肪细胞的脂质积累。ANGPTL8的含量与高血脂症、动脉粥样硬化和糖尿病的发生密切相关。目前,关于ANGPTL8调控前体脂肪细胞分化与脂质沉积的分子机制尚不清楚。因此,本研究在建立牛前体脂肪细胞原代培养方法的基础上,利用腺病毒介导的过表达与慢病毒介导基因沉默技术,研究ANGPTL8影响牛脂肪沉积的作用机理。同时,在转录水平上初步探索ANGPTL8的表达调控模式,揭示其潜在的成脂相关转录因子结合位点。主要研究结果有:1.通过qRT-PCR技术对ANGPTL8基因的表达谱分析发现,ANGPTL8基因在成年牛的心、肝、肾、小肠、肌肉、脂肪组织中均有表达,脂肪组织的表达丰度显著高于其他组织;通过组织块法培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化,诱导分化过程中ANGPTL8表达水平随脂肪细胞分化成熟过程显著升高,其表达模式与脂蛋白脂酶(LPL)表达趋势一致。2.过表达ANGPTL8的牛前体脂肪细胞油红O染色结果表明,过表达ANGPTL8将导致细胞脂质积累能力显著增强,并将显著降低诱导过程中SREBP1、LPL基因的表达量,但对脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα没有显著性影响。3.克隆获得牛ANGPTL8基因上游启动子区不同缺失片段,双荧光素酶报告基因检测结果表明,ANGPTL8核心启动子区为-522~-885区域。生物信息学预测发现,ANGPTL8基因启动子区存在PPARγ、SREBP1、C/EBPα、Znf423转录因子结合位点,SREBP1与PPARγ结合区域缺失片段启动子活性显著降低,提示SREBP1与PPARγ能促进ANGPTL8基因转录。综上所述,本研究成功建立了牛前体脂肪细胞原代培养及诱导方法,获得了ANGPTL8组织与细胞表达谱,并构建了ANGPTL8过表达与干扰病毒载体,初步确定ANGPTL8基因促进牛前体脂肪细胞脂质积累,ANGPTL8基因的表达受SREBP1与PPARγ转录因子的调控,本研究结果为探究ANGPTL8调控前体脂肪细胞分化与脂质沉积的机制提供了理论基础。
【学位单位】：信阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：Q953
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1.1 脂肪组织的形成过程
    1.2 脂肪细胞分化过程调控机制
        1.2.1 生长抑制
        1.2.2 克隆增殖
        1.2.3 早期分化
        1.2.4 终末分化
    1.3 脂肪细胞分化的转录调控的信号通路
        1.3.1 过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）
        1.3.2 CCAAT/增强子结合蛋白家族（C/EBPs）
        1.3.3 脂蛋白脂肪酶（LPL）
    1.4 ANGPTLS家族
        1.4.1 Angptls与甘油三酯代谢
        1.4.2 ANGPTL8与脂肪组织的形成
    1.5 脂肪细胞分化的研究模型
        1.5.1 前脂肪细胞系
        1.5.2 原代前体脂肪培养技术
    1.6 研究目的与意义
第二章 牛ANGPTL8基因组织与原代前体脂肪细胞表达特性分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 牛前体脂肪细胞培养观察
        2.2.2 牛原代前体脂肪细胞诱导分化油红O染色
        2.2.3 RNA提取和质检
        2.2.4 脂肪细胞分化相关基因的定量检测
        2.2.5 牛ANGPTL8组织表达特征
        2.2.6 原代脂肪细胞ANGPTL8诱导不同阶段表达特征
    2.3 讨论
第三章 牛ANGPTL8基因对脂肪沉积的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 过表达ANGPTL8前体脂肪细胞形态学观察
        3.2.2 过表达ANGPTL8对牛脂肪细胞分化的影响
    3.3 讨论
第四章 牛ANGPTL8基因启动子活性分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 生物信息学分析ANGPTL8启动子区转录因子结合位点
        4.2.2 牛ANGPTL8基因启动子片段的PCR克隆
        4.2.3 pGL3-ANGPTL8启动子报告基因构建
        4.2.4 ANGPTL8基因启动子片段的转录活性
        4.2.5 Insulin/IBMX处理对ANGPTL8启动子片段转录活性影响
    4.3 讨论
结论
下一步开展的工作
参考文献
附录
致谢

【参考文献】

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1 Silvia I Anghel;Walter Wahli;;Fat poetry: a kingdom for PPARγ[J];Cell Research;2007年06期

本文编号：2889496