利用CRISPR/FnCas9|Cas9基因编辑技术培育广谱抗PRSV番木瓜的初步研究
发布时间：2020-12-06 18:41
本研究通过针对海南岛番木瓜发病情况进行采样调查,进一步确认了番木瓜环斑病毒（papaya ringspot virus,PRSV）仍然是目前严重危害海南地区番木瓜生产的主要病害,严重制约着番木瓜产业的发展,给农民带来巨大的经济损失。常规的田间管理或栽培措施对病毒控制的效果较差或者成本较高,防治PRSV最直接有效的措施是种植抗病品种,目前商业化种植的主要抗病品种都是转基因品系。但是通过我们的调查发现,现有的转基因品系己经对PRSV的一些株系表现出抗性减弱,甚至不抗的现象。近几年发展起来的CRISPR技术提供了新的抗病毒策略。我们通过与美国明尼苏达大学Dan Voytas实验室合作,在本实验室建立起了用golden gate法构建CRISPR基因编辑载体的体系,构建了两套基因编辑载体。（1）将编辑DNA双链的CRISPR/Cas9系统进行了改造,用FnCas9替换了 Cas9的CRISPR/FnCas9系统可以识别切割RNA。本研究对病毒不同株系和不同基因的保守区域进行分析,并设计了多个不同的gRNA,串联到植物转化表达载体中,可以对不同株系的病毒进行识别并切割其RNA,真正达到广谱抗PR...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１全球番木瓜产ａ：与其他重要热带水果的比较（２０１４年）??Ｆｉｇ．ｌ?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｏｕｔｐｕｔ?ｏｆ?ｐａｐａｙａ?ｗｉｔｈ?ｏｔｈｅｒ?ｉｍｐｏｒｔａｎｔ?ｔｒｏｐｉｃａｌ?ｆｒｕｉｔｓ?（２０１４）??
（Ｍｉｎｇ，?ｅｔａＬ，?２００８）；同时这将为研究番木瓜的抗病机制找出病毒作用靶点，培育高??产抗病品质优良的番木瓜提供理论依据。我国番木瓜种植区主要位于热带和亚热带地??区，如台湾、海南、广东、广西、云南、四川等地区（林尤奋，２００４）。如图２所示，??２??
ｎａｓａｓ，?Ａ％；?５９Ｋ）和夕卜壳蛋白（ｃｏａｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＣＰ；?３５Ｋ）。??ＰＲＳＶ植株的叶片上会表现出嵌纹、黄化和扭曲的症状，果实上会茎和叶柄上则会出现水渍状油性条纹。ＰＲＳＶ是由几种蚜虫以非持的，这个过程同时还需要ＣＰ和／／Ｃ－ｉＶｏ的参与（Ｐｉｒｏｎｅ?ａｎｄ?Ｂｌａｎｃ，毒分离物可以分为两种类型：Ｐ型和Ｗ型。ＰＲＳＶ－Ｐ和ＰＲＳＶ－Ｗ都物，但是只有ＰＲＳＶ－Ｐ能在自然状态下感染番木瓜（Ｇｏｎｓａｌｖｅｓ，?ｅｔ?ａｌ．，的ＰＲＳＶ均可以接种到用作单病斑分离的藜科作物上，且只会引起于番木瓜科和葫芦科植物则是系统发病。ＰＲＳＶ在我国于１９５９年（任佩瑜等，丨９６４），迄今为止ＰＲＳＶ己广泛流行于世界范围内的限制约着番木瓜产业的进一步持续发展。目前已报道的ＰＲＳＶ－Ｐ危区有非洲、亚洲热带地区、加勒比地区、美洲中部和南部地区、南ｎａｎｔ，?ＦｅｒｍｉｎａｎｄＲｏｙｅ，２００７）。由于ＰＲＳＶ分布如此广泛，现在它己热带地区番木瓜生产的主要限制因素。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用现代生物技术防治番木瓜RNA病毒研究进展[J]. 赵辉,贺萍萍,郭静远,孔华,郭安平. 分子植物育种. 2017(11)
[2]番木瓜病虫害防治[J]. 郁建强. 农家之友. 2015(11)
[3]海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定[J]. 张雨良,黄启星,郭安平,曾会才,赵辉,孔华,刘志昕. 热带作物学报. 2013(12)
[4]原核表达的PRSV HC-Pro基因同源dsRNA诱导番木瓜抗性的研究[J]. 杨国峰,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏. 园艺学报. 2013(07)
[5]植物抗病毒侵染的分子机制[J]. 侯静,刘青青,徐明良. 作物学报. 2012(05)
[6]甘蔗转HC-Pro基因的研究[J]. 郭莺,阮妙鸿,吴杨,刘佳,杨川毓,张木清. 热带作物学报. 2010(06)
[7]VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性[J]. 阮小蕾,王加峰,李华平. 华中农业大学学报. 2009(04)
[8]抗PRSV转基因番木瓜研究进展[J]. 高艳梅,翟金玲,徐远峰,黄惜. 安徽农学通报(上半月刊). 2009(03)
[9]植物抗病毒基因工程研究进展[J]. 刘佳,吴忠义,张秀海,王永勤,黄丛林. 中国农学通报. 2009(01)
[10]番木瓜环斑病毒研究进展[J]. 黄江华,黄嘉薇,张建军,彭仁. 安徽农业科学. 2008(08)
博士论文
[1]番木瓜畸形花叶病毒检测鉴定及侵染性克隆构建与应用[D]. 庹德财.海南大学 2015
[2]番木瓜花粉管转基因技术及RNA介导广谱抗病性的初步研究[D]. 魏军亚.华南热带农业大学 2006
本文编号：2901855
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１全球番木瓜产ａ：与其他重要热带水果的比较（２０１４年）??Ｆｉｇ．ｌ?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｏｕｔｐｕｔ?ｏｆ?ｐａｐａｙａ?ｗｉｔｈ?ｏｔｈｅｒ?ｉｍｐｏｒｔａｎｔ?ｔｒｏｐｉｃａｌ?ｆｒｕｉｔｓ?（２０１４）??
（Ｍｉｎｇ，?ｅｔａＬ，?２００８）；同时这将为研究番木瓜的抗病机制找出病毒作用靶点，培育高??产抗病品质优良的番木瓜提供理论依据。我国番木瓜种植区主要位于热带和亚热带地??区，如台湾、海南、广东、广西、云南、四川等地区（林尤奋，２００４）。如图２所示，??２??
ｎａｓａｓ，?Ａ％；?５９Ｋ）和夕卜壳蛋白（ｃｏａｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＣＰ；?３５Ｋ）。??ＰＲＳＶ植株的叶片上会表现出嵌纹、黄化和扭曲的症状，果实上会茎和叶柄上则会出现水渍状油性条纹。ＰＲＳＶ是由几种蚜虫以非持的，这个过程同时还需要ＣＰ和／／Ｃ－ｉＶｏ的参与（Ｐｉｒｏｎｅ?ａｎｄ?Ｂｌａｎｃ，毒分离物可以分为两种类型：Ｐ型和Ｗ型。ＰＲＳＶ－Ｐ和ＰＲＳＶ－Ｗ都物，但是只有ＰＲＳＶ－Ｐ能在自然状态下感染番木瓜（Ｇｏｎｓａｌｖｅｓ，?ｅｔ?ａｌ．，的ＰＲＳＶ均可以接种到用作单病斑分离的藜科作物上，且只会引起于番木瓜科和葫芦科植物则是系统发病。ＰＲＳＶ在我国于１９５９年（任佩瑜等，丨９６４），迄今为止ＰＲＳＶ己广泛流行于世界范围内的限制约着番木瓜产业的进一步持续发展。目前已报道的ＰＲＳＶ－Ｐ危区有非洲、亚洲热带地区、加勒比地区、美洲中部和南部地区、南ｎａｎｔ，?ＦｅｒｍｉｎａｎｄＲｏｙｅ，２００７）。由于ＰＲＳＶ分布如此广泛，现在它己热带地区番木瓜生产的主要限制因素。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用现代生物技术防治番木瓜RNA病毒研究进展[J]. 赵辉,贺萍萍,郭静远,孔华,郭安平. 分子植物育种. 2017(11)
[2]番木瓜病虫害防治[J]. 郁建强. 农家之友. 2015(11)
[3]海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定[J]. 张雨良,黄启星,郭安平,曾会才,赵辉,孔华,刘志昕. 热带作物学报. 2013(12)
[4]原核表达的PRSV HC-Pro基因同源dsRNA诱导番木瓜抗性的研究[J]. 杨国峰,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏. 园艺学报. 2013(07)
[5]植物抗病毒侵染的分子机制[J]. 侯静,刘青青,徐明良. 作物学报. 2012(05)
[6]甘蔗转HC-Pro基因的研究[J]. 郭莺,阮妙鸿,吴杨,刘佳,杨川毓,张木清. 热带作物学报. 2010(06)
[7]VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性[J]. 阮小蕾,王加峰,李华平. 华中农业大学学报. 2009(04)
[8]抗PRSV转基因番木瓜研究进展[J]. 高艳梅,翟金玲,徐远峰,黄惜. 安徽农学通报(上半月刊). 2009(03)
[9]植物抗病毒基因工程研究进展[J]. 刘佳,吴忠义,张秀海,王永勤,黄丛林. 中国农学通报. 2009(01)
[10]番木瓜环斑病毒研究进展[J]. 黄江华,黄嘉薇,张建军,彭仁. 安徽农业科学. 2008(08)
博士论文
[1]番木瓜畸形花叶病毒检测鉴定及侵染性克隆构建与应用[D]. 庹德财.海南大学 2015
[2]番木瓜花粉管转基因技术及RNA介导广谱抗病性的初步研究[D]. 魏军亚.华南热带农业大学 2006
本文编号：2901855
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