桂花（+）-新薄荷醇脱氢酶基因OfMNR的克隆与表达分析
发布时间：2020-12-19 09:22
(+)-新薄荷醇脱氢酶是一种单萜脱氢酶,参与单萜物质（+）-新薄荷醇和（+）-异薄荷醇的合成。利用RACE技术,从桂花花瓣中克隆获得1个桂花MNR基因的cDNA全长,命名为OfMNR。OfMNR基因序列长度为1 092 bp,包含936 bp的开放阅读框,编码312个氨基酸。序列分析表明:OfMNR编码的氨基酸序列与其他植物中预测的MNR具有较高的相似性。采用qPCR技术检测了OfMNR在桂花2个品种的不同组织和不同花期中的表达量,发现OfMNR在2个品种中花瓣的表达量均最高,并且在4个花期中呈现不同的变化趋势。
【文章来源】：分子植物育种. 2016年06期 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
OfMNR基因的全长序列及其编码的氨基酸序列Figure1Full-lengthsequenceandcodingaminoacidofOfMNRgene
根和叶片中次之，而在茎中表达量最低。OfMNR基因在波叶金桂和日香桂的4个花期香眼期、初花期、盛花期和末花期同样均有表达，但两个品种的结果具有差异性，波叶金桂在香眼期有小幅下降，随后逐步升高，在末花期到达峰值。日香桂从香眼期表达量逐步升高，到盛花期达到峰值，随后在末花期降低(图6)。2讨论MNR基因在植物单萜类的代谢过程中有重要图2OfMNR基因的中间片段(A),3'RACE(B),5'RACE(C)和ORF扩增(D)注:M:DL2501Figure2Fragment(A),RACE(B)andORF(C)amplicationofOfMNR(D)Note:M:DL2501图3OfMNR蛋白质序列的特征性结构域Figure3CharacteristicdomainofOfMNR图4蛋白质二级结构预测Figure4Proteinsecondarystructureprediction1391
分子植物育种MolecularPlantBreeding3材料与方法3.1试材植物材料包括2个桂花品种，分别是波叶金桂Osmanthusfragrans'BoyeJingui'和日香桂Osmanthusfragrans'RixiangGui'2个品种，均来自南京林业大学校园内，树龄分别为30a和15a，栽培管理条件一致。(1)花瓣的采集：东、南、西、北4个方位均进行采花，采集香眼期、初花期、盛花期、末花期四个发育时期的花瓣；(2)茎段的采集：取当年生枝条，用枝剪将其分段；(3)叶片的采集：取当年生叶片，用剪刀将叶片中脉去掉；(4)根的采集：将当年生枝条作为母本进行扦插，获得扦插苗，取其根系。以上植物材料在采集后迅速装于离心管内，液氮速冻后，-80℃超低温冰箱保存备用(母洪娜等,2015)。3.2基因克隆按照植物总RNA提取试剂盒(Tiangen)，对桂花花瓣RNA进行提取，用NanoDrop2000检测提取的RNA浓度和OD值，并用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。使用RevertAidTM第一链cDNASynthesis试剂盒(ThermoScientific)合成第一链cDNA。PCR反应体系为：cDNA模板50ng，10×PCRBuffer(Mg2+free)5.0μL，MgCl2(25mmol/L)5μL，dNTPMixture(2.5mmol/Leach)8μL，正反引物(10mmol/L)各2.0μL，TaKaRaLATaq(5U/μL)0.5μL，加ddH2O至总体系50.0μL。PCR反应程序为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃2min，30个循环；72℃10min。扩增产物经过电泳检测后，使用胶回收试剂盒(TransGenBiotech)从琼脂糖凝胶中回收DNA片段，使用pEASY-T1CloningKit进行TA克隆，将阳性克隆鉴定后送公司测序。根据测序结果设计RACE引物，对目的基因进行巢式PCR扩增3'端和5'端，具体按照3'-FullRACECoreSetwithPrimeScriptTMRTase和5'-FullRACE
【参考文献】：
期刊论文
[1]桂花花瓣醇酰基转移酶基因的克隆与表达[J]. 刘偲,曾祥玲,郑日如,罗靖,王彩云. 华中农业大学学报. 2016(01)
[2]桂花香气相关基因DXPS基因克隆及表达分析[J]. 陈丽莉,陈容,覃杰明,张党权. 分子植物育种. 2015(11)
[3]月月桂AACT基因的cDNA全长克隆及生物信息学分析[J]. 郑玉娟,周文化,张党权,陈丽莉,陈容,龚建平. 中南林业科技大学学报. 2015(06)
[4]两个桂花品种花色色素相关基因的差异表达[J]. 母洪娜,孙陶泽,杨秀莲,王良桂. 南京林业大学学报(自然科学版). 2015(03)
[5]不同桂花品种香气成分的差异分析[J]. 杨秀莲,施婷婷,文爱林,王良桂. 东北林业大学学报. 2015(01)
[6]保存方法对桂花精油提取及香气成分的影响[J]. 施婷婷,杨秀莲,赵林果,王良桂. 南京林业大学学报(自然科学版). 2014(S1)
[7]花香的生物合成、调控及基因工程研究进展[J]. 樊荣辉,黄敏玲,钟淮钦,吴建设,叶秀仙. 中国细胞生物学学报. 2011(09)
[8]植物花香代谢调节与基因工程研究进展[J]. 赵印泉,周斯建,彭培好,潘会堂,张启翔. 热带亚热带植物学报. 2011(04)
[9]桂花苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析[J]. 张威威,许锋,张芙蓉,王燕,程水源. 华北农学报. 2010(05)
[10]花香的基因工程研究进展[J]. 向林,陈龙清. 中国农业科学. 2009(06)
硕士论文
[1]中国部分桂花品种芳香成分研究[D]. 孙宝军.河南大学 2011
本文编号：2925658
【文章来源】：分子植物育种. 2016年06期 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
OfMNR基因的全长序列及其编码的氨基酸序列Figure1Full-lengthsequenceandcodingaminoacidofOfMNRgene
根和叶片中次之，而在茎中表达量最低。OfMNR基因在波叶金桂和日香桂的4个花期香眼期、初花期、盛花期和末花期同样均有表达，但两个品种的结果具有差异性，波叶金桂在香眼期有小幅下降，随后逐步升高，在末花期到达峰值。日香桂从香眼期表达量逐步升高，到盛花期达到峰值，随后在末花期降低(图6)。2讨论MNR基因在植物单萜类的代谢过程中有重要图2OfMNR基因的中间片段(A),3'RACE(B),5'RACE(C)和ORF扩增(D)注:M:DL2501Figure2Fragment(A),RACE(B)andORF(C)amplicationofOfMNR(D)Note:M:DL2501图3OfMNR蛋白质序列的特征性结构域Figure3CharacteristicdomainofOfMNR图4蛋白质二级结构预测Figure4Proteinsecondarystructureprediction1391
分子植物育种MolecularPlantBreeding3材料与方法3.1试材植物材料包括2个桂花品种，分别是波叶金桂Osmanthusfragrans'BoyeJingui'和日香桂Osmanthusfragrans'RixiangGui'2个品种，均来自南京林业大学校园内，树龄分别为30a和15a，栽培管理条件一致。(1)花瓣的采集：东、南、西、北4个方位均进行采花，采集香眼期、初花期、盛花期、末花期四个发育时期的花瓣；(2)茎段的采集：取当年生枝条，用枝剪将其分段；(3)叶片的采集：取当年生叶片，用剪刀将叶片中脉去掉；(4)根的采集：将当年生枝条作为母本进行扦插，获得扦插苗，取其根系。以上植物材料在采集后迅速装于离心管内，液氮速冻后，-80℃超低温冰箱保存备用(母洪娜等,2015)。3.2基因克隆按照植物总RNA提取试剂盒(Tiangen)，对桂花花瓣RNA进行提取，用NanoDrop2000检测提取的RNA浓度和OD值，并用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。使用RevertAidTM第一链cDNASynthesis试剂盒(ThermoScientific)合成第一链cDNA。PCR反应体系为：cDNA模板50ng，10×PCRBuffer(Mg2+free)5.0μL，MgCl2(25mmol/L)5μL，dNTPMixture(2.5mmol/Leach)8μL，正反引物(10mmol/L)各2.0μL，TaKaRaLATaq(5U/μL)0.5μL，加ddH2O至总体系50.0μL。PCR反应程序为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃2min，30个循环；72℃10min。扩增产物经过电泳检测后，使用胶回收试剂盒(TransGenBiotech)从琼脂糖凝胶中回收DNA片段，使用pEASY-T1CloningKit进行TA克隆，将阳性克隆鉴定后送公司测序。根据测序结果设计RACE引物，对目的基因进行巢式PCR扩增3'端和5'端，具体按照3'-FullRACECoreSetwithPrimeScriptTMRTase和5'-FullRACE
【参考文献】：
期刊论文
[1]桂花花瓣醇酰基转移酶基因的克隆与表达[J]. 刘偲,曾祥玲,郑日如,罗靖,王彩云. 华中农业大学学报. 2016(01)
[2]桂花香气相关基因DXPS基因克隆及表达分析[J]. 陈丽莉,陈容,覃杰明,张党权. 分子植物育种. 2015(11)
[3]月月桂AACT基因的cDNA全长克隆及生物信息学分析[J]. 郑玉娟,周文化,张党权,陈丽莉,陈容,龚建平. 中南林业科技大学学报. 2015(06)
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[5]不同桂花品种香气成分的差异分析[J]. 杨秀莲,施婷婷,文爱林,王良桂. 东北林业大学学报. 2015(01)
[6]保存方法对桂花精油提取及香气成分的影响[J]. 施婷婷,杨秀莲,赵林果,王良桂. 南京林业大学学报(自然科学版). 2014(S1)
[7]花香的生物合成、调控及基因工程研究进展[J]. 樊荣辉,黄敏玲,钟淮钦,吴建设,叶秀仙. 中国细胞生物学学报. 2011(09)
[8]植物花香代谢调节与基因工程研究进展[J]. 赵印泉,周斯建,彭培好,潘会堂,张启翔. 热带亚热带植物学报. 2011(04)
[9]桂花苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析[J]. 张威威,许锋,张芙蓉,王燕,程水源. 华北农学报. 2010(05)
[10]花香的基因工程研究进展[J]. 向林,陈龙清. 中国农业科学. 2009(06)
硕士论文
[1]中国部分桂花品种芳香成分研究[D]. 孙宝军.河南大学 2011
本文编号：2925658
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2925658.html
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