DSCAM基因多态性与先天性巨结肠易感性的关系分析及DSCAM基因缺陷先天性巨结肠细胞模型的建立

发布时间：2020-12-21 00:41

　　一、研究背景先天性巨结肠（Hirschsprung disease HSCR）为小儿常见的肠道动力性疾病,总体发病率为1/5000[1],为胚胎期肠神经系统发育异常所致,多基因作用下如在发育中某个或者多个环节出现异常则导致结肠神经化失败,表现为肠段肌间及粘膜下无神经节,故HSCR又称为肠无神经节疾病[2.3]。患儿通常在出生后即出现远端肠梗阻的症状,如不及时治疗,将危及生命。目前除全肠型巨结肠无有效治疗方法外,其他类型巨结肠皆以手术切除病变肠段为主,但许多患者术后仍出现大便失禁,便秘和小肠结肠炎等长期并发症[4.5]。可见HSCR患儿术后的痊愈情况仍需担忧,所以深入研究肠道神经节缺失的发育学基础,发展新的治疗手段,具有十分重要的意义。HSCR为胚胎期肠神经嵴细胞（Enteric neural crest cell,ENCSC）增殖、迁移、分化异常致结肠神经化失败。研究发现,在胚胎发育过程中,ENCSC最早于孕5周出现在发育中的食管,然后由头端开始向尾肠迁移,沿着发育中的肠道迁移,同时伴随着增殖,神经元和神经胶质细胞分化,于孕12周时到达远端结肠,最后神经化结肠形成功能性神经节[6]。动... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１本课题研宄病人血液细胞的ＤＳＣＡＭ基因外显子测序

??Ｈ??图１－２经培养得到的原代细胞??ＤＳＣＡＭ＿／－－ＤＦｓ（Ａ）和?Ｃｏｎ－ＤＦｓ（Ｂ）?（ｂａｒ＝２００?ｐｍ）?（ＤＦｓ：成纤维细胞）??３．３逆转录病毒包装??将三种质粒（ｐＵＭＶＣ、ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ?和?ｐＭＸ－ＧＦＰ）共转染?２９３ＦＴ?细胞，??可制备用于感染人成纤维细胞的逆转录病毒。ＧＦＰ基因表达之后使细胞呈现绿??色荧光。同时，ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ质粒的表达促使细胞融合的发生。在一定程度??上，融合程度与病毒毒力正相关（图１－３）。??４．；?“??图１－３经质粒转染ＰＭＸ－ｈｒＧＦＰ４８小时后的２９３ＦＴ细胞形态及荧光表达（ｂａｒ＝１００??｜ｊ．ｍ）??３．４?ＨＳＣＤＦｓ（Ｃ）、Ｃｏｎ－ＤＦｓ?重编程为?ＤＳＣＡＭ－／ＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｈｉＰＳＣｓ?细胞??将包装了?〇ｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ和Ｋｌｆ４四个转录因子的逆转录病毒共感染??ＤＳＣＡＭｖＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｉＰＳＣｓ?（图?１－４Ａ）和（１－４Ａ１），在约第?３?天观察，可见细??３１??

可制备用于感染人成纤维细胞的逆转录病毒。ＧＦＰ基因表达之后使细胞呈现绿??色荧光。同时，ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ质粒的表达促使细胞融合的发生。在一定程度??上，融合程度与病毒毒力正相关（图１－３）。??４．；?“??图１－３经质粒转染ＰＭＸ－ｈｒＧＦＰ４８小时后的２９３ＦＴ细胞形态及荧光表达（ｂａｒ＝１００??｜ｊ．ｍ）??３．４?ＨＳＣＤＦｓ（Ｃ）、Ｃｏｎ－ＤＦｓ?重编程为?ＤＳＣＡＭ－／ＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｈｉＰＳＣｓ?细胞??将包装了?〇ｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ和Ｋｌｆ４四个转录因子的逆转录病毒共感染??ＤＳＣＡＭｖＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｉＰＳＣｓ?（图?１－４Ａ）和（１－４Ａ１），在约第?３?天观察，可见细??３１??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic interactions and modifi er genes in Hirschsprung’s disease[J]. Adam S Wallace,Richard B Anderson.  World Journal of Gastroenterology. 2011(45)



本文编号：2928862