利用CRISPR/Cas9技术构建CREB基因敲除细胞系并探讨CREB对APP基因的表达调控作用

发布时间：2020-12-22 23:26

　　目的淀粉样前体蛋白APP是一个多功能的跨膜蛋白,能够促进神经元的分化和突触的形成。在病理情况下,淀粉样前体蛋白的异常水解可形成一种由42个氨基酸组成的淀粉样多肽片段,该片段的沉积可对神经元产生不可逆的损害作用并导致记忆力下降,因此也被认为是引起阿尔茨海默病的一个重要的假说。阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病。环磷腺苷效应元件结合蛋白CREB是重要的核转录因子。有研究发现,AD患者大脑中CREB含量下降,APP蛋白含量明显上升,然而CREB对APP的调控作用还不清楚。因此我们利用了CRISPR/Cas9技术将小鼠海马神经元细胞系（HT22细胞系）中CREB基因敲除,进一步探讨CREB对于APP的表达调控作用,并探讨其具体作用机制。方法1.构建pX459-CREB质粒;将设计好的三组sgRNA插入到pX459质粒当中;2.验证pX459-CREB质粒的活性;将构建好的pX459-CREB-1/2/3质粒转染进HT22细胞中,提取全基因组DNA进行检测,利用短链PCR测序法和T7E1酶切法验证构建质粒的活性;3.利用pX459-CREB质粒构建CREB基因敲除的HT22细胞系,进行Wes... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞周期调控的研究[J]. 吴爽,谢明宏,安娜.  科学技术创新. 2018(01)



本文编号：2932635