肿瘤靶向荧光成像及基因治疗一体化碳点研究

发布时间：2020-12-31 01:13

　　开发了一种新型的集肿瘤靶向识别及基因传递功能一体的递送系统用于肿瘤的诊断及治疗。碳量子点（CDs）为载体的核心部分,使其具有荧光成像的作用,键合正电荷密度较高的枝状聚乙烯亚胺（bPEI,1000Da）,可紧密结合DNA并可通过“质子海绵作用”促进内涵体逃逸;通过细胞膜表面的免疫逃逸蛋白和同源靶向蛋白作用为纳米粒子提供靶向性。1.CDs及其PEI修饰载体的合成和表征通过微波合成法将尿素和柠檬酸以2:1的比例合成CDs,利用TEM对其形貌进行表征,结果显示CDs粒径在5 nm左右,且分散均匀;FTIR结果表明CDs富含羧基（-COOH）;紫外最大吸收波长为411 nm,荧光光谱显示在460 nm激发下最大发射波长为535 nm。CDs与可有效压缩DNA的bPEI发生酰化反应,使CDs-PEI表面带有正电荷,TEM结果显示CDs-PEI粒径约为10 nm,FTIR结果显示出现酰胺键（-CO-NH-）和氨基（-NH₂）,表明PEI成功键合在CDs上。DLS结果显示CDs键合PEI后电位由-16.5 mV升高至24 mV。CDs-PEI紫外最大吸收波长为335 nm,荧光光... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 基因治疗简介
    1.2 肿瘤基因治疗发展现状
    1.3 肿瘤基因治疗策略
        1.3.1 基因沉默治疗
        1.3.2 抑癌基因治疗
        1.3.3 免疫基因治疗
        1.3.4 抗肿瘤血管生成治疗
        1.3.5 肿瘤多药耐药基因治疗
        1.3.6 抗端粒酶治疗
        1.3.7 多基因联合治疗
    1.4 基因治疗载体
        1.4.1 病毒载体
        1.4.2 非病毒载体
    1.5 荧光纳米材料
    1.6 细胞膜靶向研究进展
    1.7 本论文的选题依据及研究内容
2 载体CDs和CDs-PEI的合成与表征
    2.1 试剂和仪器
        2.1.1 试剂
        2.1.2 仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 载体CDs和CDs-PEI的合成
        2.2.2 傅立叶红外光谱分析（FTIR）
        2.2.3 透射电镜分析（TEM）
        2.2.4 紫外吸收光谱分析
        2.2.5 荧光光谱分析
        2.2.6 荧光量子产率分析
        2.2.7 缓冲能力
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 载体CDs和CDs-PEI的合成与表征
        2.3.2 光学性能表征
        2.3.3 缓冲能力
    2.4 小结
3 CDs-PEI及CDs-PEI/M递送外源基因能力的研究
    3.1 试剂和仪器
        3.1.1 试剂
        3.1.2 仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M的制备及表征
        3.2.2 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的稳定性
        3.2.3 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的DNaseI消化保护实验
        3.2.4 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的血清保护实验
        3.2.5 细胞毒性
        3.2.6 CDs-PEI/pDsRed2-N1和CDs-PEI/pDsRed2-N1/M体外转染
        3.2.7 抑癌实验
        3.2.8 统计学分析
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的制备及表征
        3.3.2 CDs-PEI和CDs-PEI/M结合pDNA的能力
        3.3.3 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的DNaseI消化保护实验
        3.3.4 CDs-PEI/pDNA和CDs-PEI/pDNA/M复合物的血清保护实验
        3.3.5 细胞毒性
        3.3.6 CDs-PEI/pDsRed2-N1和CDs-PEI/pDsRed2-N1/M体外转染
        3.3.7 抑癌实验
    3.4 小结
4 细胞膜的靶向性能研究
    4.1 试剂与仪器
        4.1.1 试剂
        4.1.2 仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 不同细胞膜包覆的CDs-PEI/M的细胞摄取
        4.2.2 不同细胞膜包覆的CDs-PEI/pDsRed2-N1/M体外转染
        4.2.3 细胞凋亡实验
        4.2.4 统计学分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 不同细胞膜包覆的CDs-PEI/M的细胞摄取
        4.3.2 不同细胞膜包覆的CDs-PEI/pDsRed2-N1/M体外转染
        4.3.3 细胞凋亡实验
    4.4 小结
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Reversal of multi-drug resistance by pSUPER-shRNA-mdr1 in vivo and in vitro[J]. Guang-Dong Pan,Jian-Qing Yang,Lv-Nan Yan,Guang-Ping Chu,Qiang Liu,Yi Xiao,Lin Yuan,Department of General Surgery,People’s Hospital of Liuzhou,Medical University of Guangxi,Liuzhou 545001,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China.  World Journal of Gastroenterology. 2009(04)
[2]基因治疗及其研究[J]. 陶铭.  生物学通报. 2008(04)
[3]阳离子脂质体的转染机制及转染效率影响因素[J]. 陈彦祥,乔卫红,刘栋良,李宗石.  生物工程学报. 2007(05)



本文编号：2948657