黄姑鱼超氧化物歧化酶家族基因的克

发布时间：2021-01-05 13:29

　　超氧化物歧化酶（SOD,EC1.15.1.1）是一种关键的酶类抗氧化物质,筑起了生物体针对氧毒性的第一道防线,将氧自由基快速歧化为普通分子氧（O₂）和过氧化氢（H₂O₂）。本研究从已构建的黄姑鱼（Nibea albiflora）转录组数据库中筛选出三种SOD基因:胞质型铜锌SOD（IcSOD,MG208871）、胞外型铜锌SOD（EcSOD,MF974567）和锰SOD（MnSOD,MG208872）,并对它们的分子特征及功能进行了研究,结果如下:（1）在氨氮和亚硝态氮急性毒性实验中,黄姑鱼表现出对氨氮胁迫更为敏感,其氨氮和亚硝态氮的96小时半致死浓度(LC₅₀)分别为20.23 mg/L（换算成非离子氨0.57 mg/L）和99.08 mg/L,安全浓度分别为2.02 mg/L（换算成非离子氨0.06 mg/L）和9.91 mg/L。（2）黄姑鱼IcSOD（NaIcSOD）cDNA全长793 bp,包括58 bp的5?非编码区（UTR）、270 bp的3?非编码区（UTR）和465 bp的开放阅读... 

【文章来源】：集美大学福建省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 黄姑鱼简介
    1.2 水环境中的无机氮及其对鱼类的影响
        1.2.1 氨氮
        1.2.2 亚硝态氮
        1.2.3 硝态氮
    1.3 氧自由基与抗氧化系统
        1.3.1 氧自由基
        1.3.2 抗氧化系统
    1.4 SOD的研究进展及应用
        1.4.1 SOD的研究进展
        1.4.2 SOD在水生动物中的研究进展
        1.4.3 SOD的应用
    1.5 研究目的及意义
第2章 黄姑鱼IcSOD基因的表达和功能研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 菌株和载体
        2.1.4 引物
        2.1.5 仪器设备
        2.1.6 培养基配置
        2.1.7 常用试剂配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验
        2.2.2 黄姑鱼健康组织取样
        2.2.3 总RNA的提取
        2.2.4 cDNA第一条链的合成及检测
        2.2.5 NaIcSODcDNA序列筛选及同源片段验证
        2.2.6 生物信息学分析
        2.2.7 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
        2.2.8 NaIcSOD的原核表达及蛋白纯化
        2.2.9 GSTpull-down
        2.2.10 纯化蛋白的SOD酶活测定及其温度/pH稳定性测试
    2.3 结果
        2.3.1 氨氮和亚硝态氮对黄姑鱼的急性毒性实验
        2.3.2 RNA提取及cDNA质量检测
        2.3.3 NaIcSOD基因的生物信息学分析
        2.3.4 NaIcSODmRNA组织分布和急性毒性实验后的表达变化
        2.3.5 NaIcSOD重组表达与纯化
        2.3.6 GST下拉寻找与黄姑鱼IcSOD相互作用的蛋白
        2.3.7 NaIcSOD的温度/pH稳定性测试
    2.4 讨论
第3章 黄姑鱼EcSOD基因的表达和功能研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 菌株和载体
        3.1.4 引物
        3.1.5 仪器设备
        3.1.6 培养基配置
        3.1.7 常用试剂配置
    3.2 实验方法
        3.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验
        3.2.2 黄姑鱼健康组织取样
        3.2.3 总RNA的提取
        3.2.4 cDNA第一条链的合成及检测
        3.2.5 NaEcSODcDNA序列筛选及同源片段验证
        3.2.6 生物信息学分析
        3.2.7 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
        3.2.8 NaEcSOD的原核表达及蛋白纯化
        3.2.9 GSTpull-down及蛋白质质谱分析
        3.2.10 纯化蛋白的SOD酶活测定及其温度/pH稳定性测试
    3.3 结果
        3.3.1 RNA提取及cDNA质量检测
        3.3.2 NaEcSOD基因的生物信息学分析
        3.3.3 NaEcSODmRNA组织分布及急性毒性实验后的表达变化
        3.3.4 NaEcSOD重组表达与纯化
        3.3.5 GST下拉寻找与黄姑鱼EcSOD相互作用的蛋白及其质谱分析
        3.3.6 NaEcSOD的温度/pH稳定性测试
    3.4 讨论
第4章 黄姑鱼MnSOD基因的表达和功能研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 菌株和载体
        4.1.4 引物
        4.1.5 仪器设备
        4.1.6 培养基配置
        4.1.7 常用试剂配置
    4.2 实验方法
        4.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验
        4.2.2 黄姑鱼健康组织取样
        4.2.3 总RNA的提取
        4.2.4 cDNA第一条链的合成及检测
        4.2.5 NaMnSODcDNA序列筛选及同源片段验证
        4.2.6 生物信息学分析
        4.2.7 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
        4.2.8 NaMnSOD的原核表达
    4.3 结果
        4.3.1 RNA提取及cDNA质量检测
        4.3.2 NaMnSOD基因的生物信息学分析
        4.3.3 NaMnSODmRNA组织分布及急性毒性实验后的表达变化
        4.3.4 NaMnSOD重组表达
    4.4 讨论
第5章 总结
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]急性氨氮胁迫对圆斑星鲽（Verasper variegatus）幼鱼鳃和肝组织结构及相关酶活性的影响[J]. 王贞杰,陈四清,曹栋正,卢斌,常青,刘长琳,燕敬平.  渔业科学进展. 2017(02)
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[3]黄姑鱼染色体识别与重复序列定位[J]. 郑娇,曹款,杨安冉,张静,王志勇,蔡明夷.  水产学报. 2016(08)
[4]常见水质指标对患腹水病黄颡鱼组织病理的影响[J]. 张涛,宋文华,富丽静,胡宗云,李赫,闫有利.  水产学杂志. 2015(03)
[5]亚硝态氮对草鱼离体肝细胞抗氧化体系的影响[J]. 尹晓燕,田兴,李大鹏,汤蓉.  淡水渔业. 2014(05)
[6]急性氨氮胁迫对脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）抗氧化系统酶活力及GPx基因表达的影响[J]. 任海,李健,李吉涛,梁忠秀,梁俊平,葛倩倩,刘萍.  农业环境科学学报. 2014(04)
[7]亚硝酸氮对红鳍东方鲀的毒性效应[J]. 汪家鑫,张钊,胡盼,姜志强,王鑫,杨晶晶,王双耀.  广东海洋大学学报. 2013(06)
[8]氨氮对草鱼幼鱼的急性毒性试验[J]. 梁健,王红权,金柏涛,唐德约,陈云飞,赵玉蓉.  科学养鱼. 2013(11)
[9]线粒体动力学与心肌细胞能量代谢的研究进展[J]. 阿力木江·买买提江,高秀芳,金波,施海明.  复旦学报(医学版). 2013(05)
[10]氨氮对青鱼幼鱼的急性毒性研究[J]. 李昭林,黄云,田芊芊,刘庄鹏,张俊智,胡毅.  科学养鱼. 2013(05)

博士论文
[1]海湾扇贝超氧化物歧化酶家族基因结构、表达和多态性分析[D]. 包永波.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009

硕士论文
[1]文蛤胞内铜锌超氧化物歧化酶的基因克隆与表达及重组蛋白活性的测定[D]. 朱丹.辽宁师范大学 2011
[2]氨氮和亚硝态氮胁迫对日本沼虾血淋巴的影响[D]. 王国江.河北大学 2008



本文编号：2958751