杆状病毒—腺相关病毒载体基因修饰骨髓间充质干细胞靶向喉咽癌放射性 131 I治疗研究
发布时间：2021-01-07 08:55
目的:喉咽癌是头颈部常见的恶性肿瘤,预后极差。基于干细胞移植的基因疗法有望改善治疗效果。本研究中,我们明确人骨髓间充质干细胞（BMSCs）是否具有潜在喉咽癌归巢能力,探索杆状病毒-腺相关病毒载体（BV-AAV）介导碘化钠同向转运体（NIS）基因修饰BMSCs靶向喉咽癌放射性131I治疗的应用价值。方法:1.构建含有Luc-P2A-eGFP或NIS序列,侧翼插入AAV来源的反向末端重复序列（ITR）的BV-AAV载体（Bac-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和Bac-CMV-NIS-ITR）。2.从感染效率,细胞毒性,多基因的正确表达这三个方面评价了BV-AAV在BMSCs中的应用价值。3.体外通过Transwell迁移试验;体内通过生物发光成像（BLI）和微单光子发射计算机断层扫描成像技术（micro-SPET/CT）示踪BMSCs体内生物学分布和肿瘤趋化性。4.利用18F-FDG micro-PET/CT评估治疗后肿瘤糖代谢情况;从肿瘤体积变化和肿瘤组织中细胞增殖标志物表达来评估治疗后肿瘤增殖情况。结果:1.MOI=400,Bac-...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR质粒经酶切电泳分析验证Figure2DNAfragmentselectrophoresisafterpFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITRplasmidDNA
上海交通大学医学院博士毕业论文23图3重组杆粒BacmidPCR产物凝胶电泳分析验证Figure2ValidationofbacmidPCRbyDNAgelelectrophoresisM：DNAmarker；1,2：M13F/M13R扩增产物，大小约6.5kb；3,4：M13F/luc2-PacI-F扩增产物，大小约4.3kb；5,6：luc2-PacI-F/luc2-2A-R扩增产物,大小约1.6kb2.4Bac-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和Bac-CMV-NIS-ITR病毒载体制备重组质粒pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和pFB-CMV-NIS-ITR经感受态菌转化，蓝白斑筛选及DNA提取获得重组杆粒DNA，借助脂质体转染杆状病毒的宿主细胞sf9，收获了第一代病毒。通过sf9细胞继续扩增得到足够体积和滴度的重组BV-AAV（图4）。
上海交通大学医学院博士毕业论文372结果2.1BMSCs诱导分化鉴定2.1.1BMSCs成骨诱导分化诱导培养至3周时可见的钙盐沉积，茜素红S染色后，钙盐呈红色，见图5图5BMSCs成骨诱导分化（100×）Figure5OsteogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，茜素红染色显示骨基质呈红色（图1b）。2.1.2BMSCs成脂诱导分化诱导培养至3周时可见的又大又圆的脂滴，油红O染色，细胞内脂肪滴呈红色，见图6。图6BMSCs成骨诱导分化（100×）Figure6AdipogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，油红O染色清楚地显示脂肪细胞中红色脂滴的形成。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mesenchymal stromal cells’ role in tumor microenvironment:involvement of signaling pathways[J]. Armel Herve Nwabo Kamdje,Paul Takam Kamga,Richard Tagne Simo,Lorella Vecchio,Paul Faustin Seke Etet,Jean Marc Muller,Giulio Bassi,Erique Lukong,Raghuveera Kumar Goel,Jeremie Mbo Amvene,Mauro Krampera. Cancer Biology & Medicine. 2017(02)
[2]Transgene expression and differentiation of baculovirus-transduced adipose-derived stem cells from dystrophin-utrophin double knock-out mouse[J]. Qiuling Li 1, 2 , Qiongxiang Zhai 2 , Jia Geng 3 , Hui Zheng 4 , Fei Chen 5 , Jie Kong 1 , Cheng Zhang 1 1 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 2 Department of Pediatrics, Guangdong General Hospital, Guangdong Neuroscience Institute, Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 3 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650032, Yunnan Province, China 4 Department of Neurology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China 5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510085, Guangdong Province, China. Neural Regeneration Research. 2012(22)
本文编号：2962270
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR质粒经酶切电泳分析验证Figure2DNAfragmentselectrophoresisafterpFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITRplasmidDNA
上海交通大学医学院博士毕业论文23图3重组杆粒BacmidPCR产物凝胶电泳分析验证Figure2ValidationofbacmidPCRbyDNAgelelectrophoresisM：DNAmarker；1,2：M13F/M13R扩增产物，大小约6.5kb；3,4：M13F/luc2-PacI-F扩增产物，大小约4.3kb；5,6：luc2-PacI-F/luc2-2A-R扩增产物,大小约1.6kb2.4Bac-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和Bac-CMV-NIS-ITR病毒载体制备重组质粒pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和pFB-CMV-NIS-ITR经感受态菌转化，蓝白斑筛选及DNA提取获得重组杆粒DNA，借助脂质体转染杆状病毒的宿主细胞sf9，收获了第一代病毒。通过sf9细胞继续扩增得到足够体积和滴度的重组BV-AAV（图4）。
上海交通大学医学院博士毕业论文372结果2.1BMSCs诱导分化鉴定2.1.1BMSCs成骨诱导分化诱导培养至3周时可见的钙盐沉积，茜素红S染色后，钙盐呈红色，见图5图5BMSCs成骨诱导分化（100×）Figure5OsteogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，茜素红染色显示骨基质呈红色（图1b）。2.1.2BMSCs成脂诱导分化诱导培养至3周时可见的又大又圆的脂滴，油红O染色，细胞内脂肪滴呈红色，见图6。图6BMSCs成骨诱导分化（100×）Figure6AdipogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，油红O染色清楚地显示脂肪细胞中红色脂滴的形成。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mesenchymal stromal cells’ role in tumor microenvironment:involvement of signaling pathways[J]. Armel Herve Nwabo Kamdje,Paul Takam Kamga,Richard Tagne Simo,Lorella Vecchio,Paul Faustin Seke Etet,Jean Marc Muller,Giulio Bassi,Erique Lukong,Raghuveera Kumar Goel,Jeremie Mbo Amvene,Mauro Krampera. Cancer Biology & Medicine. 2017(02)
[2]Transgene expression and differentiation of baculovirus-transduced adipose-derived stem cells from dystrophin-utrophin double knock-out mouse[J]. Qiuling Li 1, 2 , Qiongxiang Zhai 2 , Jia Geng 3 , Hui Zheng 4 , Fei Chen 5 , Jie Kong 1 , Cheng Zhang 1 1 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 2 Department of Pediatrics, Guangdong General Hospital, Guangdong Neuroscience Institute, Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 3 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650032, Yunnan Province, China 4 Department of Neurology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China 5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510085, Guangdong Province, China. Neural Regeneration Research. 2012(22)
本文编号：2962270
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2962270.html
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