中华蜜蜂抗逆相关基因AccMKP3和AccApoD的分离与功能分析
发布时间：2021-01-09 10:07
中华蜜蜂是我国独特的本土蜂种,具有重要的经济价值和社会效益。然而,由于各种外界胁迫的影响,其生存受到严重威胁,种群数量不断降低。为了更好地保护中华蜜蜂这一珍贵的种质资源,利用分子生物学手段研究其体内的抗逆相关基因势在必行。丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶（MAP kinase phosphatases,MKPs）和载脂蛋白D（Apolipoprotein D,ApoD）能够参与细胞对多种刺激的响应,在生长发育、免疫反应、氧化应激以及各种疾病相关的生理反应过程中都扮演着重要角色。本研究以中华蜜蜂为实验材料,分离得到了AccMKP3和AccApoD两个基因,并对其进行了一系列的功能分析。主要研究结果如下:（1）通过RT-PCR的方法获得AccMKP3和AccApoD基因的编码区序列。AccMKP3基因的编码区序列长度为1203bp,编码400个氨基酸,预测其蛋白分子量和等电点分别为43.9kDa和4.90。AccApoD基因的编码区序列为714bp,编码237个氨基酸,预测其蛋白分子量和等电点分别为27.7kDa和8.42。（2）通过氨基酸序列比对和进化树分析发现,MKP3和ApoD的序列都在不同...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AccMKP3基因的PCR扩增电泳图
34图 3-2AccMKP3 的氨基酸序列比对分析保守区域以黑色阴影突出显示。将保守的催化结构域用黑色线框住，并用黑色圆点标记相应的氨基酸残基。关键的 KIM 基序用直线标出。Fig. 3-2 Multiple sequence alignment of AccMKP3Conserved regions are shaded in black. The conserved catalytic domain is boxed, and the corresponding amino acidresidues are marked with black dots. The critical KIM motif is indicated by a horizontal line.为了进一步探索中华蜜蜂 AccMKP3 与 DUSP 家族不同成员之间的进化关系，本研究利用 MEGA 4.1 软件构建了一个系统进化树。如图 3-3 所示，可以看出中华蜜蜂AccMKP3 在进化关系上与同属于 MKP 亚族的意大利蜜蜂 AmMKP3 最为密切。
图 3-3AccMKP3 的进化树分析通过软件 MEGA4.0 以及邻接法（NJ）构建进化树。所有的氨基酸序列均从 NCBI 数据库获得。图中显示了 DUSP家族的 6 个分类，其中 AccMKP3 以黑色方框突出显示。Fig. 3-3 Phylogenetic analysis of AccMKP3The phylogenetic tree was constructed by MEGA version 4.0 with the neighbor-joining (NJ) method. All amino acidsequences were obtained from the NCBI database. Six main groups of the DUSP superfamily are shown, and AccMKP3 isboxed.3.1.3 AccMKP3 基因启动子序列分析为了探究中华蜜蜂 AccMKP3 基因的生物学功能，本研究从 NCBI 数据库获得了位于其转录起始位点上游 1094bp 的启动子序列，并通过启动子预测网站 TFBIND INPUT对这段序列进行了转录因子结合位点分析。如图 3-4 所示，启动子区域显示有多个与调节环境胁迫及免疫反应相关的顺式作用元件，包括热休克因子（HSF），cAMP 反应元件结合蛋白（CREB），激活蛋白-1（AP-1），p53，Nkx-Ⅱ和 NFκB 等（Lee et al., 2018;Li et al., 2018a; Mazaira et al., 2018）。另外，在该启动子区域还发现了一些与胚胎或组
【参考文献】：
期刊论文
[1]小而密低密度脂蛋白胆固醇在心脑血管系统相关疾病中的意义[J]. 王胜奎,周俊. 检验医学. 2019(01)
[2]中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展[J]. 孟飞,胥保华,郭兴启. 应用昆虫学报. 2012(05)
硕士论文
[1]中华蜜蜂（Apis cerana）群体多样性的研究[D]. 丁桂玲.中国农业科学院 2006
本文编号：2966442
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AccMKP3基因的PCR扩增电泳图
34图 3-2AccMKP3 的氨基酸序列比对分析保守区域以黑色阴影突出显示。将保守的催化结构域用黑色线框住，并用黑色圆点标记相应的氨基酸残基。关键的 KIM 基序用直线标出。Fig. 3-2 Multiple sequence alignment of AccMKP3Conserved regions are shaded in black. The conserved catalytic domain is boxed, and the corresponding amino acidresidues are marked with black dots. The critical KIM motif is indicated by a horizontal line.为了进一步探索中华蜜蜂 AccMKP3 与 DUSP 家族不同成员之间的进化关系，本研究利用 MEGA 4.1 软件构建了一个系统进化树。如图 3-3 所示，可以看出中华蜜蜂AccMKP3 在进化关系上与同属于 MKP 亚族的意大利蜜蜂 AmMKP3 最为密切。
图 3-3AccMKP3 的进化树分析通过软件 MEGA4.0 以及邻接法（NJ）构建进化树。所有的氨基酸序列均从 NCBI 数据库获得。图中显示了 DUSP家族的 6 个分类，其中 AccMKP3 以黑色方框突出显示。Fig. 3-3 Phylogenetic analysis of AccMKP3The phylogenetic tree was constructed by MEGA version 4.0 with the neighbor-joining (NJ) method. All amino acidsequences were obtained from the NCBI database. Six main groups of the DUSP superfamily are shown, and AccMKP3 isboxed.3.1.3 AccMKP3 基因启动子序列分析为了探究中华蜜蜂 AccMKP3 基因的生物学功能，本研究从 NCBI 数据库获得了位于其转录起始位点上游 1094bp 的启动子序列，并通过启动子预测网站 TFBIND INPUT对这段序列进行了转录因子结合位点分析。如图 3-4 所示，启动子区域显示有多个与调节环境胁迫及免疫反应相关的顺式作用元件，包括热休克因子（HSF），cAMP 反应元件结合蛋白（CREB），激活蛋白-1（AP-1），p53，Nkx-Ⅱ和 NFκB 等（Lee et al., 2018;Li et al., 2018a; Mazaira et al., 2018）。另外，在该启动子区域还发现了一些与胚胎或组
【参考文献】：
期刊论文
[1]小而密低密度脂蛋白胆固醇在心脑血管系统相关疾病中的意义[J]. 王胜奎,周俊. 检验医学. 2019(01)
[2]中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展[J]. 孟飞,胥保华,郭兴启. 应用昆虫学报. 2012(05)
硕士论文
[1]中华蜜蜂（Apis cerana）群体多样性的研究[D]. 丁桂玲.中国农业科学院 2006
本文编号：2966442
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