多发性骨髓瘤RAS/RAF基因突变及其circRNA表达谱的研究

发布时间：2021-01-12 22:57

　　目的:多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是一种具有广泛基因异质性的疾病,其发生机制除了要经历免疫球蛋白重链基因重排以外,还要经历体细胞高频突变,其中主要突变包括KRAS、NRS、BR4F等基因突变,这些突变可能与MM克隆演变、细胞耐药与预后密切相关。本研究目的主要包括:1.探究KRAS、NRAS、BRAF基因突变在MM患者中的表达情况及这些基因突变是否与MM不良预后相关。2.探究数字微滴 PCR（droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR）方法检测上述基因突变的可行性,以及采用该手段检测外周血循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA,ctDNA）基因突变与骨髓样本检出率的一致性。3.探究泛Raf抑制剂LY3009120抗MM细胞增殖的作用机制。方法:1.ddPCR方法检测MM患者KRAS、NRAS、BRAF基因突变情况:以天津医科大学肿瘤医院血液科2010年至2016年收治的85例初诊MM患者为研究对象,与患者签署知情同意书后,提取骨髓单个核细胞、骨髓浆、外周血ctDNA,采用ddPCR的方法检测B... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

移液枪转移混合物操作示意图

连孔盒转移到８连孔支架上（也可先将８连孔盒放后在转移混合物），在支架的两端套上胶垫，保证响液滴生成。??色按钮打开液滴生成器，将８连孔支架连同８连孔，保证放置位置准确，液滴生成器中间指示灯呈按下液滴生成器绿色按钮，液滴生成器关闭开始生示灯闪烁表示液滴正在生成，当液滴生成完毕后３常壳。??色按钮打开液滴生成器取出支架，丢弃胶垫，在８到明显的液滴，样品孔和液滴生成油孔内几乎没有作要平稳缓慢，避免液滴破碎）。??及ＰＣＲ反应??液枪调至４０ｕｌ，从８连孔盒液滴孔内缓慢的吸取液孔底部并且与孔壁保持３（Ｔ－４０？角（图３），吸取能高于８ｕｌ每秒。??ｉｅｔｔｉ

者血浆ｃｔＤＮＡ中检测出５兄４ＦＭ：突变而骨髓单个核中未检出；１例患者骨髓单??个核检测出以突变而血浆ｃｔＤＮＡ中未检出；１例患者骨髓单个核中检测??出尺Ｍｅ突变，血浆和骨髓浆ｃｔＤＮＡ中均未检出。（图２，表２）??表１．ＭＭ患者流行病学资料?表２．不同样本ＲＡＳ／ＲＡＦ基因突变??．．?Ｎｏ．?ｏｆ?ｐａｔｉｅｎｔｓ?ｎ〇．?ｏｆ??ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ?Ｍｕｔａｔｉｏｎ?ｔｅｓｔ??ｕ＝８５）?ｐａｔｉｅｎｔｓ??Ａｇｅ?（ｍｅｄｉａ?ｉｎ?ｙｅａｒｓ）?６３?（４０￣８２）?Ｂｏｎｅ?ｍａｒｒｏｗ?ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ?ｃｅｌｌｓ?８５??Ｇｅｎｄｅｒ?ＢＲＡＦＶ６００?４?（５％）??Ｍａｌｅ?５５?（６４．７％）?ＫＲＡＳＧ１２／Ｇ１３?１５?（１８％）??Ｆｅｍａｌｅ?３０?（３５．３）?ＮＲＡＳＧ１２／Ｇ１３?３?（４％）??Ｓｔａｇｅ?ＮＲＡＳ０６１?１５?（１８％）??Ｉ?Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ?ｂｌｏｏｄ?ｓｅｒｕｍ?２０??ｎ?２４?ＢＲＡＦＶ６


本文编号：2973705