尼氏真绥螨卵黄原蛋白基因的克隆与表达分析
发布时间：2021-01-17 12:46
尼氏真绥螨Euseius nicholsi（Ehara et Lee）隶属于植绥螨科Phytoseidae,是一种重要的捕食性螨类,主要捕食二斑叶螨（Tetranyus urticae）、柑橘全爪螨（Panonychus citri）、苹果全爪螨（Panonychus ulmi）等农业害螨。该螨具有繁殖速度快、发育历期短、捕食量高等优点,在生物防治中具有很好的应用潜力,但至今未实现低成本扩繁。卵黄原蛋白（Vitellogenin）是卵生动物卵黄蛋白的前体,在卵黄发生和胚胎形成中起决定性作用,可以作为衡量生物繁殖能力的标志物。了解尼氏真绥螨卵黄原蛋白的分子信息可以迅速地评估人工饲料的适宜性。目前未见关于尼氏真绥螨卵黄原蛋白的分子信息的报道。本研究分析了饲喂不同食物后对尼氏真绥螨产卵量和孵化率的影响;克隆获得尼氏真绥螨的两个卵黄原蛋白基因,并探讨了两个基因在不同发育阶段和不同食物饲喂后mRNA的表达模式。主要结果如下:一、不同食物饲喂后对尼氏真绥螨产卵量和孵化率的影响尼氏真绥螨在交配之后即可产卵,其产卵量开始急剧增加,在第4天达到峰值,随后产卵量逐渐下降。本研究发现,不同食物饲喂会显著地影...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２不同食物词喂后尼氏真绥螨总产卵量??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｆｅｃｕｎｄｉｔｙ?ｏｆ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ?ａｆｔｅｒ?ｆｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｓｏｕｒｃｅｓ??
?第２章不同食物饲喂对尼氏真绥螨产卵量和孵化率的影响???１２０．０％?■??ｌｏｏ．ｏ％?■?＾?ａ?ａ?ａ??！?—?（?１?Ｂ?Ｊ??６〇－〇％＇?１１１?；ｉ??１?；］§?ｉ?１１??Ｐ．ｃｉｔｒｉ?Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ?ｐｏｌｌｅｎ?Ｔ．?Ｃｉｎ?ｎａｂ?ａｒｉｎ?ｕｓ?Ｃ．?ｏ?ｌｅｉｆｅｒａ?Ａ?ｂｅｔ?ｐｏｌｌｅｎ??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－３不同食物饲喂后尼氏真绥螨卵的孵化率??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｇｇ?ｈａｔｃｈ?ｒａｔｅ?ｏｆ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ?ａｆｔｅｒ?ｆｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｓｏｕｒｃｅｓ??２．３小结与讨论??本研宂比较了尼氏真绥螨捕食自然猎物与取食植物花粉之后的产卵规律，为??寻找廉价的人工饲料提供依据。研宄发现，食物类型会显著地影响螨虫种群的动??态变化。柑橘全爪螨饲喂的尼氏真绥螨总产卵量最高，每雌产卵量达到２２．４７粒，??分别是饲喂朱砂叶螨组和词喂茶花花粉组的产卵量的１．１１和１．２３倍，饲喂油茶??花粉的总产卵量最低，仅为１５．４７粒。王吉和赵云龙等人分别研究了不同食物饲??喂对江原钝绥螨和胡瓜钝绥螨繁殖力的影响，研宄发现饲喂食物不同会导致江原??钝绥螨和胡瓜钝绥螨在产卵量上出现差异［２１＿＇己有研宄表明，性腺的营养摄入??和最佳分配可以增强个体的繁殖力，而不同食物中含有的可溶性蛋白和糖分含量??不同，因此不同的食物饲喂可以显著影响螨虫种群的动态变化［１２］。不同饲喂组中，??尼氏真绥蠘卵的孵化率均在９０％以上，各组之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。己有研宄??表明，食物类型对尼氏真绥螨卵的孵化率影响不显著
?第３章尼氏真绥螨卵黄原蛋白基因全长的克隆???３．２结果与分析??３．２．１尼氏真绥蜗卵黄原蛋白ｃＤＮＡ全长克隆结果??３．２．１．１尼氏真绥螨总ＲＮＡ提取质？??使用１％的琼脂糖凝胶检测总ＲＮＡ样品的质量，电泳检测到２８?Ｓ和１８?Ｓ两??条明显的亮带，结果如图３－１所示。使用微量分光光度计（ＮａｎｏＤｒｏｐ?２０００）检测??到总ＲＮＡ样品的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．０３，由此可知总ＲＮＡ完整性良好，可以??进行下一步实验。??Ｍａｋｅｒ?ＲＮＡ??｜晒３碧??２０００?ｂｐ｜?＿?２８Ｓ??１０００?ｂｐ?■?＇??７５０?ｂｐ?Ｈ｜?１?邏?１８Ｓ??ｉ〇〇?ｂＰ?＾??图３－１尼氏真绥螨总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｔｈｅ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ??３．２．１．２尼氏真绥螨卵黄原蛋白保守序列的扩增??以反转得到的ｃＤＮＡ为模板，使用引物对作７－５Ｒ、??３Ｆ／￡ｎＦｇ八３Ｒ、￡＂Ｋｇ２－３Ｆ／￡＂ｂ２－３Ｒ进行ＰＣＲ。将ＰＣＲ产物??进行电泳检测，结果如图３－２所示。片段１为引物对￡？吃７况／心１令；－５１１扩增产物，??片段２为引物对仏Ｆｇ２－５Ｆ／￡？?Ｆｇ２－５?Ｒ扩增产物，片段３为引物对及７?－３?Ｆ／￡ｎ?－??３Ｒ扩增产物，片段４为引物对沿７作２－３Ｆ／Ｂ７Ｆｇ２－３Ｒ扩增产物。将ＰＣＲ产物送往上海??生物有限责任公司测序，然后在ＮＣＢＩ网站比对确认测序结果。??２１??
本文编号：2982911
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２不同食物词喂后尼氏真绥螨总产卵量??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｆｅｃｕｎｄｉｔｙ?ｏｆ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ?ａｆｔｅｒ?ｆｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｓｏｕｒｃｅｓ??
?第２章不同食物饲喂对尼氏真绥螨产卵量和孵化率的影响???１２０．０％?■??ｌｏｏ．ｏ％?■?＾?ａ?ａ?ａ??！?—?（?１?Ｂ?Ｊ??６〇－〇％＇?１１１?；ｉ??１?；］§?ｉ?１１??Ｐ．ｃｉｔｒｉ?Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ?ｐｏｌｌｅｎ?Ｔ．?Ｃｉｎ?ｎａｂ?ａｒｉｎ?ｕｓ?Ｃ．?ｏ?ｌｅｉｆｅｒａ?Ａ?ｂｅｔ?ｐｏｌｌｅｎ??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－３不同食物饲喂后尼氏真绥螨卵的孵化率??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｇｇ?ｈａｔｃｈ?ｒａｔｅ?ｏｆ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ?ａｆｔｅｒ?ｆｅｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｆｏｏｄ?ｓｏｕｒｃｅｓ??２．３小结与讨论??本研宂比较了尼氏真绥螨捕食自然猎物与取食植物花粉之后的产卵规律，为??寻找廉价的人工饲料提供依据。研宄发现，食物类型会显著地影响螨虫种群的动??态变化。柑橘全爪螨饲喂的尼氏真绥螨总产卵量最高，每雌产卵量达到２２．４７粒，??分别是饲喂朱砂叶螨组和词喂茶花花粉组的产卵量的１．１１和１．２３倍，饲喂油茶??花粉的总产卵量最低，仅为１５．４７粒。王吉和赵云龙等人分别研究了不同食物饲??喂对江原钝绥螨和胡瓜钝绥螨繁殖力的影响，研宄发现饲喂食物不同会导致江原??钝绥螨和胡瓜钝绥螨在产卵量上出现差异［２１＿＇己有研宄表明，性腺的营养摄入??和最佳分配可以增强个体的繁殖力，而不同食物中含有的可溶性蛋白和糖分含量??不同，因此不同的食物饲喂可以显著影响螨虫种群的动态变化［１２］。不同饲喂组中，??尼氏真绥蠘卵的孵化率均在９０％以上，各组之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。己有研宄??表明，食物类型对尼氏真绥螨卵的孵化率影响不显著
?第３章尼氏真绥螨卵黄原蛋白基因全长的克隆???３．２结果与分析??３．２．１尼氏真绥蜗卵黄原蛋白ｃＤＮＡ全长克隆结果??３．２．１．１尼氏真绥螨总ＲＮＡ提取质？??使用１％的琼脂糖凝胶检测总ＲＮＡ样品的质量，电泳检测到２８?Ｓ和１８?Ｓ两??条明显的亮带，结果如图３－１所示。使用微量分光光度计（ＮａｎｏＤｒｏｐ?２０００）检测??到总ＲＮＡ样品的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．０３，由此可知总ＲＮＡ完整性良好，可以??进行下一步实验。??Ｍａｋｅｒ?ＲＮＡ??｜晒３碧??２０００?ｂｐ｜?＿?２８Ｓ??１０００?ｂｐ?■?＇??７５０?ｂｐ?Ｈ｜?１?邏?１８Ｓ??ｉ〇〇?ｂＰ?＾??图３－１尼氏真绥螨总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｔｈｅ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｅ．?ｎｉｃｈｏｌｓｉ??３．２．１．２尼氏真绥螨卵黄原蛋白保守序列的扩增??以反转得到的ｃＤＮＡ为模板，使用引物对作７－５Ｒ、??３Ｆ／￡ｎＦｇ八３Ｒ、￡＂Ｋｇ２－３Ｆ／￡＂ｂ２－３Ｒ进行ＰＣＲ。将ＰＣＲ产物??进行电泳检测，结果如图３－２所示。片段１为引物对￡？吃７况／心１令；－５１１扩增产物，??片段２为引物对仏Ｆｇ２－５Ｆ／￡？?Ｆｇ２－５?Ｒ扩增产物，片段３为引物对及７?－３?Ｆ／￡ｎ?－??３Ｒ扩增产物，片段４为引物对沿７作２－３Ｆ／Ｂ７Ｆｇ２－３Ｒ扩增产物。将ＰＣＲ产物送往上海??生物有限责任公司测序，然后在ＮＣＢＩ网站比对确认测序结果。??２１??
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