USP22上调VEGFA基因转录的分子机制初探及其在肝细胞肝癌中作用研究

发布时间：2021-01-18 06:15

　　目的:原发性肝癌被预测为2018年全球第六大最常被诊断癌症和全球第四大癌症死亡原因,肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）被认为是原发性肝癌的最常见形式。大多数HCC患者表现为晚期,为了开发HCC患者治疗的新策略,对HCC发生和发展过程中涉及的分子机制的探究是必要的。血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）是血管生成的关键调控因子,抗血管生成疗法在肝癌治疗中的作用已被公认,对HCC中影响VEGFA表达的分子机制的研究十分必要。泛素特异肽酶22（ubiquitin specific peptidase 22,USP22）是去泛素化酶（de-ubiquitylation enzymes,DUBs）家族的一员,在HCC中,USP22起促癌作用,但具体机制尚不明确。本研究探讨了USP22调节VEGFA转录的分子机制及其对HCC细胞生长、肿瘤发生和血管生成拟态的影响,为HCC治疗及靶点的探索提供新思路。研究方法:1、Western blot法检测USP22及VEDFA蛋白在HCC组织中表达情况,Pe... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

USP22及VEGFA在HCC组织中高表达且呈正相关A:35对HCC癌组织及对应癌旁组织USP22及VEGFA蛋白表达情况Westernblot条带；B:USP22及VEGFA蛋白表达情况柱状图；C:USP22与VEGFA蛋白表达情况Pearson相关性

沉默USP22减少VEGFA和HIF-1α蛋白表达及VEGFAmRNA表达A：沉默USP22后VEGFA和HIF-1α蛋白表达情况；B：沉默USP22后VEGFA和HIF-1αmRNA表达情况；Cocl2表示氯化钴，抑制脯氨酰基羟化酶，模拟缺氧环境；数据以均数±

中国医科大学硕士学位29进一步通过CHX实验验证缺氧条件下USP22对HIF-1α蛋白的稳定作用，实验结果显示，对于siNC组，与未加CHX处理的细胞相比，加入CHX处理0.5h和1h的细胞HIF-1α蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；对于siUSP22组，与未加CHX处理的细胞相比，加入CHX处理0.5h和1h的细胞HIF-1α蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），与加入CHX处理0.5h的细胞相比，加入CHX处理1h的细胞HIF-1α蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与siNC组未加CHX处理时的细胞相比，siUSP22组未加CHX处理时的细胞HIF-1α蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），且与siNC组HIF-1α蛋白表达随CHX处理降低的速度相比，siUSP22组HIF-1α蛋白表达随CHX处理降低的速度较快（图4）。以上结果进一步证实USP22在缺氧条件下稳定HIF-1α蛋白表达，且这一作用不是通过抑制细胞合成实现的，提示我们这一作用可能与抑制蛋白降解有关。图4缺氧条件下USP22稳定HIF-1αA：CHX实验Westernblot条带图；B：HIF-1α蛋白表达柱状图；CHX表示放线菌酮，一种蛋白合成抑制剂；Cocl2表示氯化钴，抑制脯氨酰基羟化酶，模拟缺氧环境；数据以均数±标准差表示（n=3），组间比较采用单因素方差分析及Tukey检验；*表示P<0.05。3.5缺氧条件下USP22对HIF-1α有去泛素化作用我们想进一步验证USP22稳定HIF-1α是否与USP22的去泛素化作用抑制蛋白降解相关。我们通过泛素化的Co-IP实验，转染His-ubiquitin质粒及加入MG132抑制泛素蛋白降解，通过Co-IP实验验证USP22对HIF-1α蛋白是否有去泛素化作用。实验结果显示，与siNC组相比，siUSP22组HIF-1α蛋白泛素化水平增加，表明缺氧条件下沉默USP22可以促进HIF-1α蛋白泛素化，即缺氧条件下USP22对HIF-

【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素-蛋白酶体系统与精子DNA损伤修复的研究进展[J]. 张国巍,蔡鸿财,商学军.  中华男科学杂志. 2016(09)



本文编号：2984439