陆地棉WUSCHEL基因的克隆与功能验证

发布时间：2021-01-19 02:18

　　棉花是一种重要的经济作物和油料作物,组织培养技术对于棉花基因功能的鉴定和生物工程育种是至关重要的,但大多数棉花品种难以通过组织培养得到再生苗,因而对于如何高效获得棉花再生苗的研究显得尤为重要。许多研究表明WUSCHEL（WUS）基因不仅在植物体胚发生的过程中发挥重要作用,还能调控芽分生组织和花分生组织的形成。本研究从陆地棉中分离并克隆了两个GhWUS基因,并将其与SRDX的融合抑制子转化中棉所24（中24,陆地棉品种）来分析了GhWUS在棉花体细胞胚胎发生中的作用,再通过将该基因的诱导型表达载体转化拟南芥进而分析了该基因在植物体胚发生和芽再生的过程中的影响,得到了以下实验结果:1.GhWUS影响棉花体胚发生。首先,通过qRT-PCR检测了GhWUS基因的的表达谱,其结果显示GhWUS在胚状体阶段的表达量较高,而在根、茎、叶中的表达量较低。其次,将GhWUS与一个抑制结构域SRDX融合形成一个嵌合的GhWUS抑制转录因子并将其转化中棉所24,发现该嵌合的抑制子能够显著抑制棉花愈伤组织向胚性愈伤组织的转变。2.诱导表达GhWUS促使拟南芥幼苗根尖形成胚状体和芽我们构建了GhWUS的pER8... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

陆地棉各组织中GhWUSs基因的相对表达量Fig2.2：RelativeexpressionlevelsoftheGhWUSsgenesindifferenttissueofGossypiumhirsutumL.

嵌合的 GhWUS 抑制子表达载体的构建及农杆菌转化构建好的表达载体35S::GhWUS1a_At-SRDX 和35S::GhWUS1b_At-SRDX 载体转入 PCR 鉴定，结果见图 2.3。图 2.3 左为 35S::GhWUS1a_At-SRDX 的鉴定结果，图 hWUS1b_At-SRDX 的鉴定结果，由图可以看出 PCR 产物片段与目的片段一致，说建成功，而且已成功转入农杆菌。

计算了愈伤组织在胚性愈伤组织诱导培养基上培育后 30，60 和 90 天的愈伤组织伤组织的分化率（形成的胚性愈伤组织占所有愈伤组织的百分比），结果显示在图我们可以看出，与 CK 相比，转化 35S::GhWUS1a_At-SRDX 和 35S::GhWUS1b_愈伤组织都呈现非常低的分化率，表明 GhWUSs-SRDX 融合抑制子的组成型表达愈伤组织的形成。这些结果表明 GhWUSs 可能在愈伤组织向胚性愈伤组织的转变作用。

【参考文献】：
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硕士论文
[1]茉莉酸促进棉花球形胚表皮细胞发育成体细胞胚的机理研究[D]. 吴洁.中国农业科学院 2016
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本文编号：2986138