VEGF基因修饰的巨噬细胞修复动脉粥样硬化小鼠血管内皮损伤的研究

发布时间：2021-01-21 00:15

　　目的:探索在早期动脉粥样硬化小鼠颈动脉损伤模型中,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）修饰的小鼠巨噬细胞是否可以作为VEGF的载体将VEGF定向输送到受损血管部位,促进损伤内皮的修复、抑制内膜增生,并探讨其相关机制。方法:1.细胞实验:传代培养本实验室前期构建并经鉴定的稳定转染细胞系VEGF-RAW264.7(同时转染人VEGF₁₆₅和绿色荧光蛋白ZsGreen1基因)、转染对照组ZsGreen1-RAW264.7（仅转染ZsGreen1）及未转染组RAW264.7细胞。将各组细胞培养48 h后,收集细胞培养上清液,通过Griess法检测一氧化氮（nitric oxide,NO）的产量;通过Western Blot检测各组的细胞中趋化因子受体2（chemokine receptor type 2,CCR2）和趋化因子受体5（chemokine receptor type5,CCR5）蛋白的表达情况,以此初探各组细胞在内膜募集数量存在差异的机制。2.动物实验:使用金属导丝制造ApoE基因缺陷型(ApoE<... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
中英文对照表（Abbreviations）
前言
1 实验材料
    1.1 实验动物
    1.2 实验细胞
    1.3 实验试剂
    1.4 实验试剂的配制
    1.5 实验仪器
2 实验方法
    2.1 细胞系的建立及分组
    2.2 细胞培养
        2.2.1 细胞复苏
        2.2.2 细胞传代
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞样本的制备
    2.3 小鼠颈动脉损伤模型的建立及实验分组
    2.4 小动物活体成像仪（IVIS）动脉成像
    2.5 免疫荧光染色及再内皮化率评估
    2.6 H&E 染色及新生内膜增生的统计
    2.7 NO产量的检测
    2.8 Western Blot实验
        2.8.1 蛋白的提取及浓度测定
        2.8.2 上样蛋白液的体系及蛋白变性
        2.8.3 配胶
        2.8.4 电泳
        2.8.5 电转
        2.8.6 封闭及抗体孵育
        2.8.7 显影及图像分析
3 统计学分析
4 结果
    4.1 注射的细胞在动脉内膜的分布
    4.2 VEGF-RAW264.7 加速损伤动脉的再内皮化并直接参与新内皮的形成
-/-小鼠血管损伤后新内膜形成">    4.3 VEGF-RAW264.7 细胞治疗抑制Apo E^-/-小鼠血管损伤后新内膜形成
    4.4 VEGF-RAW264.7细胞治疗提高受损颈动脉局部VEGF浓度
    4.5 VEGF-RAW264.7细胞中NO产量增加
    4.6 VEGF‐RAW264.7 细胞中CCR2 表达无变化,CCR5 表达上调
5 讨论与展望
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：2990061