目的基因大小对脂质体转染效率影响的研究

发布时间：2021-01-21 04:29

　　目的研究使用脂质体转染时目的基因大小对转染效率影响。方法将大小差异显著的目的基因连接到同一载体,脂质体转染法分别将上述两种目的基因转染至FRT细胞,转染完成24 h后,应用倒置荧光显微镜和流式细胞仪分析转染效率,检测目的基因的大小对转染效率的影响。结果转染效率均随着脂质体用量增加而上升,无论脂质体浓度如何选择,两种真核表达载体的转染效率均有显著性差异,且目的基因越大,转染效率越低。结论目的基因与转染效率成反比。 

【文章来源】：吉林医药学院学报. 2020,41(04)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

倒置荧光显微镜观测转染结果

脂质体转染因操作简单且不需要特殊仪器设备而被广泛接受[3],目的基因的大小被认为对转染效率有较明显的影响[4]。转染时,不管实际使用的载体如何,转染试剂说明书给出的方法都是相同的,但是实际操作时,不同的目的基因转染时的效率不同。而转染效率越高,后续获得阳性克隆的概率越大。本研究选用连接在相同载体上启动子相同而目的基因大小不等的两种真核表达载体ANO1-EGFP/pcDNA3.1和YFP/pcDNA3.1,梯度设置脂质体用量,选取易于转染的FRT细胞进行研究。ANO1-EGFP/pcDNA3.1和YFP/pcDNA3.1均表达荧光,便于实验的观察和检测。构建的载体中,ANO1大小为2871 bp,EGFP大小为720 bp,YFP大小为720 bp[5-6],可以知道ANO1-EGFP大小显著大于YFP,在相同实验条件下检测得YFP的转染效率高于ANO1-EGFP的转染效率。因此,本研究证实,无论脂质体用量如何,目的基因大小影响用脂质体转染时的效率,且目的基因越大,转染效率越低。研究结果对于今后脂质体转染工作具有指导作用,脂质体转染试剂说明书并没有考虑到目的基因的大小,而不同大小的目的基因使用脂质体转染时结果差异较大。而转染效率越高,后续的实验结果也会更好[7],并且瞬时转染的转染效率越高,后续筛选时获得阳性克隆的概率越大。所以在不损伤细胞的情况下,目的基因较大时,脂质体用量可以适当增加。后续研究可以针对不同的细胞对脂质体转染是否有影响,以及确定多大量的脂质体会对细胞产生毒害作用。

【参考文献】：
期刊论文
[1]YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究[J]. 郑锴,朱杭飞,王长文,郭素红,李正祎,藏雨轩,张雲乔,郑岩,方芳,郝峰.  中国兽医杂志. 2015(10)
[2]anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性[J]. 郝峰,王皓,许会静,方青,张丽,朱杭飞,张雲乔,鞠晓红.  吉林大学学报(医学版). 2014(06)
[3]诱导K562细胞分化对EDAG基因表达的影响[J]. 方芳,陈忠航,张宸豪,许望翔,马爱新.  吉林医药学院学报. 2005(04)



本文编号：2990460