应用重组表达的SELENOF和基因敲除鼠研究SELENOF的生物学功能

发布时间：2021-01-21 05:49

　　硒作为生命体中的必需微量元素有着增强人体免疫能力,降低病毒感染,防治癌症等功能。而在生物体内,硒蛋白是硒元素（Se）发挥生物学作用的主要载体,迄今为止,人体中共发现有25种硒蛋白。在体内环境下,由于硒蛋白中的硒代半胱氨酸（Sec）比半胱氨酸（Cys）的活性更强且更易亲合,使它在氧化还原反应中发挥了重要作用,硒蛋白的氧化还原功能研究也因此更为完整全面,其中硫氧还蛋白氧化还原酶家族（TrxRs）、谷胱甘肽过氧化物酶家族（GPXs）和脱碘酶家族（DIOs）是目前为止了解最为清楚的硒蛋白家族。与之相比,人们对其他硒蛋白的具体结构和功能知之甚少,本文所研究的硒蛋白F（SELENOF）也是如此。文献报道SELENOF是Trx样折叠超家族中的一员;能通过其N端富含Cys的区域与UDP-葡萄糖:糖蛋白葡萄糖基转移酶（UGGT）紧密结合,增强UGGT的酶活性,推测SELENOF可与UGGT共同参与内质网（ER）上糖蛋白折叠的加工过程;且结构上与ER上的一种二硫键异构酶（PDI）高度相似,并在表面有含Sec的氧化还原活性基序（-CxU-）。虽然对SELENOF结构的探究越来越完善,但其潜在功能尚未被验证,... 

【文章来源】：深圳大学广东省

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SELENOF的三级结构图

应用重组表达的 SELENOF 和基因敲除鼠研究 SELENOF 的生物学功能第 3 章 结果与分析实验纯化验所构建的质粒，表达出的蛋白为 SELENOF(Sec→Cys)-GB1-His-ta 蛋白，需要在第一次镍柱亲和层析后进行酶切，使得 SELENOF(S溶蛋白 GB1 和标签蛋白 His 分开，再进行二次镍柱亲和层析，得到纯ENOF(Sec→Cys)。

图 3 胶内酶切后质谱图挖取图 2 酶切后组的 15kDa 左右的蛋白条带，进行胶内酶切，所得溶液进行质谱分析。质谱结果显示（如图 3），有较高纯度的肽段来至于人源 15kDa 硒蛋白(SELENOF)可用于后续的体外实验。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2990587