SOD1转基因猴分子表型的检测及体外运动神经元的定向分化

发布时间：2021-01-21 17:32

　　研究背景:肌萎缩侧索硬化症（Amyotrophic lateral sclerasis,ALS）是一种主要损伤人类的大脑皮层、脑干和脊髓运动神经元的神经性退行性疾病。这些部位的运动神经元受到损伤时,它们会失去与肌肉或者腺体的连接,控制的肌肉出现肌束震颤,导致肌肉自发性抽搐,最终出现萎缩。肌萎缩侧索硬化症发病通常始于四肢,多在确认患病的3⁵年内死于呼吸系统衰竭。临床上根据其病理将肌萎缩侧索硬化症分为散发性肌萎缩侧索硬化症（Sporadic Amyotrophic lateral sclerosis,SALS）和家族性肌萎缩侧索硬化症（Family Amyotrophic lateral sclera-sis,FALS）两种类型,其中家族型肌萎缩侧索硬化症（FALS）约占所有ALS的10%左右,遗传方式多数为常染色体显性遗传,少数是X连锁或常染色体隐性遗传。目前对于ALS的致病机理仍然不是很清楚,临床上也缺乏有效的治疗手段,唯一有效的药物-力如太,也只能提高病人的生活质量,延长3个月左右的寿命。近年来,很多ALS的疾病模型被建立,其中主要包括果蝇、啮齿类和猪等模型,这... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：105 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

自1990年以来的ALS基因发现该每个圆圈的大小反映了所有家族性ALS病例的相关比例使用该基因（例如，SOD1为20％，

36图2hSOD1G93A转基因猴组织原代建系A.组织建系后的第4天；B.P1代细胞第2天；C.P1代细胞第5天。比例尺100um。Figure2EstablishhSOD1G93Atransgenicmonkeyfibroblastlines.A.Day4afterthetransgenicmonkeyeartissueadherent.B.Day2ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.C.Day5ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.scalebar：100um利用EDTA-Na2的采血管，采取食蟹猴新鲜血液1~2ml和成纤维细胞约(1*105)进行DNA的提取，分别检测6只食蟹猴的DNA水平突变基因hSOD1G93A的插入情况。血液和成纤维细胞DNA除了在处理样品稍有不同外，提取的方法大体相同。根据插入突变基因hSOD1G93A的cDNA，用NCBI或者primer5进行合适的引物设计。正式实验之前，利用梯度PCR找到目的基因合适的退火温度（Tm）和延伸时间，进行基因组DNAPCR扩增，检测基因hSOD1G93A的在猴子体内的插入情况。目的基因扩增后，将PCR反应产物进行电泳检测和PCR产物进行纯化。结果发现：6只转基因电泳均有条带；同正常hSOD1片段进行比对，发现6只小猴均成功插入hSOD1G93A基因。如图(图2，A,B)。图3hSOD1G93A转基因猴耳朵及血液的基因组PCR及产物的测序A.6只转基因猴和三只野生型的DNA的扩增，插入片段的大小是400bp左右.B.6只转基因猴和正常基因的测序比对。

36图2hSOD1G93A转基因猴组织原代建系A.组织建系后的第4天；B.P1代细胞第2天；C.P1代细胞第5天。比例尺100um。Figure2EstablishhSOD1G93Atransgenicmonkeyfibroblastlines.A.Day4afterthetransgenicmonkeyeartissueadherent.B.Day2ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.C.Day5ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.scalebar：100um利用EDTA-Na2的采血管，采取食蟹猴新鲜血液1~2ml和成纤维细胞约(1*105)进行DNA的提取，分别检测6只食蟹猴的DNA水平突变基因hSOD1G93A的插入情况。血液和成纤维细胞DNA除了在处理样品稍有不同外，提取的方法大体相同。根据插入突变基因hSOD1G93A的cDNA，用NCBI或者primer5进行合适的引物设计。正式实验之前，利用梯度PCR找到目的基因合适的退火温度（Tm）和延伸时间，进行基因组DNAPCR扩增，检测基因hSOD1G93A的在猴子体内的插入情况。目的基因扩增后，将PCR反应产物进行电泳检测和PCR产物进行纯化。结果发现：6只转基因电泳均有条带；同正常hSOD1片段进行比对，发现6只小猴均成功插入hSOD1G93A基因。如图(图2，A,B)。图3hSOD1G93A转基因猴耳朵及血液的基因组PCR及产物的测序A.6只转基因猴和三只野生型的DNA的扩增，插入片段的大小是400bp左右.B.6只转基因猴和正常基因的测序比对。

【参考文献】：
期刊论文
[1]无血清培养人胚胎干细胞的体系研究与进展[J]. 张哲,曾宪卓,鲁菲,郭明辉,董慧君.  中国组织工程研究. 2015(41)



本文编号：2991597