玉米光周期敏感基因ZmCOL3的功能解析
发布时间：2021-01-22 13:00
光周期敏感性的存在严重限制了热带、亚热带玉米种质资源在温带地区的利用,深入了解玉米开花期调控的遗传规律,分离光周期敏感基因,解析其调控开花期机制,可为玉米区域适应性遗传改良育种提供理论依据。本课题组前期通过候选基因关联分析发现,玉米ZmCOL3（C2C2-CO-like-transcription factor 3）与开花期紧密连锁,但调控ZmCOL3表达是否可以有效改良玉米开花期至今未知。为此本研究开展以下工作:1.ZmCOL3的获得和生物信息学分析。以玉米品种B73为供试材料,获得ZmCOL3基因CDS。序列分析表明,该基因全长1545bp,共有两个转录本,分别命名为ZmCOL3 T01和ZmCOL3 T02,其中转录本T01存在一个B-box-type zinc finger结构域和CCT（CO,CO-LIKE and TIMING OF CAB1）结构域。生物信息学预测,T01可能调控玉米开花期,并具有细胞核定位功能。2.ZmCOL3的亚细胞定位。构建绿色荧光蛋白（green fluorescent protein）基因gfp融合表达载体,利用玉米原生质体转化技术,将重组质粒转...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ZmCOL3序列分析
图 3.2 过表达载体构建a：载体图谱；b：菌液 PCR；c：SpeI 和 SacI 双酶切Fig.3.2 Overexpression vector constructiona: Vector map; b: PCR detection; c: SpeI and SacI double enzymes RNAi 抑制载体构建抑制表达是研究基因功能的另一种有效手段。考虑到很多生物学表型，本研究进一步构建了 ZmCOL3 抑制表达载体米材料。本研究采用的抑制表达策略为 RNAi 技术。Zm该家族成员核苷酸序列 NCBI Blast（https://blast.ncbi.nlm.似性高达 80％，为有效筛选 RNAi 序列，尽可能的避免脱人工选择方法，分别选取两段 200bp 特异性强的靶序列，NAi 抑制载体。干扰片段送生工生物工程（上海）股份有性内切酶 SacI 和 SpeI 将两个干扰片段分别连接到上，获得重组质粒 pCAMBIA3300::RNAi 1 和 pCAMBIA3CR 验证以及 SpeI 和 SacI 双酶切验证：RNAi 1 PCR 产物
图 3.3 RNAi 抑制载体构建b：RNAi 1 菌液 PCR；c：RNAi 2 菌液 PCR；d：SpeI 和 SaFig.3.3 RNAi inhibition vector constructionr map; b: PCR detection of RNAi 1; c: PCR detection of RNAid: SpeI and SacI double enzymes表达载体构建及玉米原生质体转化基因家族成员的功能位置多数都定位到了细胞核，生置同样在细胞核内，为了验证这一结果，用限制性内切有 gfp 的植物表达载体 pCAMBIA1302 连接，COL3。对重组质粒进行 PCR 验证，1%琼脂糖凝胶电泳检peI 双酶切验证结果显示重组质粒可切下 1008bp 大小切验证结果证实成功构建 ZmCOL3 融合表达载体，见表达载体利用原生质体转化技术转化进入玉米原生质生质体，发现在细胞核中有明显的绿色荧光存在，而
【参考文献】：
期刊论文
[1]玉米ClpR2同源基因PL5L15的克隆及其在不同光周期处理下的表达分析[J]. 陈晓,孙朝辉,李思远,陈彦惠. 分子植物育种. 2008(06)
[2]植物FLOWERING LOCUS T/TERMINAL FLOWER1基因家族的研究进展[J]. 常丽丽,吴连成,库丽霞,孙朝辉,王新涛,陈彦惠. 西北植物学报. 2008(04)
[3]玉米光周期敏感类Hd6基因的克隆和实时定量表达分析[J]. 李思远,陈晓,王新涛,陈彦惠. 作物学报. 2008(04)
[4]玉米类LFY基因的克隆及其在不同光周期条件下的表达[J]. 高伟,陈晓,库丽霞,任永哲,常胜合,王铁固,陈彦惠. 作物学报. 2006(08)
[5]温、热生态环境下玉米生育性状的遗传研究[J]. 郭瑞,王海斌,陈彦惠. 河南农业科学. 2005(06)
[6]不同玉米种质对长光周期反应的初步研究[J]. 张凤路,S.MUGO. 玉米科学. 2001(04)
博士论文
[1]水稻多效性基因Ghd7的克隆和功能分析[D]. 翁小煜.华中农业大学 2014
本文编号：2993272
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ZmCOL3序列分析
图 3.2 过表达载体构建a：载体图谱；b：菌液 PCR；c：SpeI 和 SacI 双酶切Fig.3.2 Overexpression vector constructiona: Vector map; b: PCR detection; c: SpeI and SacI double enzymes RNAi 抑制载体构建抑制表达是研究基因功能的另一种有效手段。考虑到很多生物学表型，本研究进一步构建了 ZmCOL3 抑制表达载体米材料。本研究采用的抑制表达策略为 RNAi 技术。Zm该家族成员核苷酸序列 NCBI Blast（https://blast.ncbi.nlm.似性高达 80％，为有效筛选 RNAi 序列，尽可能的避免脱人工选择方法，分别选取两段 200bp 特异性强的靶序列，NAi 抑制载体。干扰片段送生工生物工程（上海）股份有性内切酶 SacI 和 SpeI 将两个干扰片段分别连接到上，获得重组质粒 pCAMBIA3300::RNAi 1 和 pCAMBIA3CR 验证以及 SpeI 和 SacI 双酶切验证：RNAi 1 PCR 产物
图 3.3 RNAi 抑制载体构建b：RNAi 1 菌液 PCR；c：RNAi 2 菌液 PCR；d：SpeI 和 SaFig.3.3 RNAi inhibition vector constructionr map; b: PCR detection of RNAi 1; c: PCR detection of RNAid: SpeI and SacI double enzymes表达载体构建及玉米原生质体转化基因家族成员的功能位置多数都定位到了细胞核，生置同样在细胞核内，为了验证这一结果，用限制性内切有 gfp 的植物表达载体 pCAMBIA1302 连接，COL3。对重组质粒进行 PCR 验证，1%琼脂糖凝胶电泳检peI 双酶切验证结果显示重组质粒可切下 1008bp 大小切验证结果证实成功构建 ZmCOL3 融合表达载体，见表达载体利用原生质体转化技术转化进入玉米原生质生质体，发现在细胞核中有明显的绿色荧光存在，而
【参考文献】：
期刊论文
[1]玉米ClpR2同源基因PL5L15的克隆及其在不同光周期处理下的表达分析[J]. 陈晓,孙朝辉,李思远,陈彦惠. 分子植物育种. 2008(06)
[2]植物FLOWERING LOCUS T/TERMINAL FLOWER1基因家族的研究进展[J]. 常丽丽,吴连成,库丽霞,孙朝辉,王新涛,陈彦惠. 西北植物学报. 2008(04)
[3]玉米光周期敏感类Hd6基因的克隆和实时定量表达分析[J]. 李思远,陈晓,王新涛,陈彦惠. 作物学报. 2008(04)
[4]玉米类LFY基因的克隆及其在不同光周期条件下的表达[J]. 高伟,陈晓,库丽霞,任永哲,常胜合,王铁固,陈彦惠. 作物学报. 2006(08)
[5]温、热生态环境下玉米生育性状的遗传研究[J]. 郭瑞,王海斌,陈彦惠. 河南农业科学. 2005(06)
[6]不同玉米种质对长光周期反应的初步研究[J]. 张凤路,S.MUGO. 玉米科学. 2001(04)
博士论文
[1]水稻多效性基因Ghd7的克隆和功能分析[D]. 翁小煜.华中农业大学 2014
本文编号：2993272
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2993272.html
最近更新
教材专著
