茶树CsCOL4基因克隆及其与CsSVP基因在成花转变中的功能研究

发布时间：2021-01-23 03:38

　　茶树（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze）是我国重要的木本经济作物,由于其茶叶和茶花中富含的天然药用成分对人类具有多种保健功效和营养价值,因此,目前对茶树经济效益的开发主要集中在茶叶和茶花营养成分的提取、分离纯化和深加工等方面。其中,茶树花芽从分化到果实成熟会持续一年之久,这种全年漫长的生殖生长势必会与茶树芽叶的营养生长争夺有机物和养分,而开花是茶树由营养生长阶段向生殖生长阶段的过渡,因此,有必要解析茶树成花转变的分子机制,合理的控制开花时间,从而获得高产高质的茶叶和优质的茶花,为茶产业的完善和发展提供理论支持。在植物成花诱导的调控途径中,CO 和SVP（SHORT VEGETATIVE PHASE）基因分别在光周期途径和温度途径中发挥着至关重要的作用。其中,CO基因作为光信号通路中的桥梁基因,控制着光信号向成花信号的转变。而SVP基因作为典型的MADS-box转录因子参与温度调控路径,通过激活或抑制下游成花基因的表达而调控开花。为了阐明茶树CaCOL4和CsSVP基因在植物成花转变中的功能。本研究以陕西茶树代表性品种“紫阳槠叶种”（Camellia sines... 

【文章来源】：陕西师范大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校

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图１－２技术路线图??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏａｄｍａｐ??

第２章茶树Ｃ＾ＣＯＵ基因克隆??次之，５ｓ?ｒＲＮＡ条带最弱，且２８ｓ的亮度约为１８ｓ的两倍，表明提取的总ＲＮＡ质??量较好，基本无降解。综上，所提取的茶树茎和幼叶总ＲＮＡ能够满足后续基因克??隆等实验的要求。??ｉ８ｓ?－＞??５ｓ?－＞??图２－１茶树茎和幼叶总ＲＮＡ??Ｍ：?ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ；?１：茎总?ＲＮＡ；?２：幼叶总?ＲＮＡ??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｓｔｅｍｓ?ａｎｄ?ｙｏｕｎｇ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｆ?Ｃ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｓｔｅｍｓ；?２：?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｙｏｕｎｇ?ｌｅａｖｅｓ??２．３．２?ＣｓＣＯＫ基因同源序列的克隆??根据ＮＣＢＩ上已提交的茶树近缘物种０７Ｌ４同源基因氨基酸序列的比对结果，??在葡萄ＦｖＣＷｉＵ基因的保守区段设计正反向特异引物，以茶树茎或幼叶ｃＤＮＡ第??一链为模板进行同源片段扩增，ＰＣＲ产物经电泳检测发现扩增出长度约为７５０?ｂｐ??的目的条带，见图２－２，与预期同源片段长度基本一致，因此，回收纯化该扩增片??段并进一步亚克隆测序。测序结果显示该片段序列长度为７３２?ｂｐ，见图２－３。经??ＮＣＢＩ数据库中的ＢＬＡＳＴ同源比对分析，见图２－４，显示该序列与葡葡，番輿，烟??草等多个物种屮的问源基因相似，相似度高达７０％左右。因此，初步预测??克隆得到的是茶树基因的保守片段，初步命名为ＣｓＣＯ＂。??２５??

ｉｚｉｎｈｕ？?ｉｔｉＫｉｂａ?ｚｉｎｃ?ｆｏｘｉｅｒ?ｏｒｏｉｅｉｎ?ＣＯＮＳＴＡＭＳ－ｌＩＫＥ?４?（ＬｖＯＣｌＱ７４ｌ９＜Ｍｒｉ?ｒｒｓＲｈｊＡ?３５７?３５７?８９％?１ｅ－９３?６８．４５％?Ｘｆｅｌ?ＱＨ￥０２８７ｆｉ３＾??－－ＰＨＥＤｉＣＴＥＤ－?ＴｈｅｏＣｆｏｍａ?ｃａｃａｏ２＞ｎｃ?（ｉｎｏｅｒ?ｐｒｏｉｅｉｎ?ＣＯＮＳＷｊＳ?ＵＫ￡?＜?ａ．ＣＸ；１Ｂ５８；６ｆｆｉ）．?ｒｒ．ＲＷ?３５２?３５２?８７％?Ａｅ－９２?６８．２８％?ａｄＪ？ｌＳ．＾ｇ｝？４．１??图２－４茶树ＣｓＣＯＷ同源片段的比对结果??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＣｓＣＯＬ４?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｆｒｏｍ?Ｃ．?ｓｉｎｅｎｓｉｓ．??２．３．３?ＣｓＣＯＬ４基因３，末端的克隆??根据２．３．２克隆得到的茶树ＣｓＣＯＩ＊／基因的同源片段，利用３＇ＲＡＣＥ正向特异??引物ＧＳＰ进行两轮ＰＣＲ扩增，第二轮巢式ＰＣＲ产物经电泳检测发现扩增出长度??约为６００?ｂｐ的目的条带，见图２－５，回收纯化该目的条带并进一步亚克隆测序。测??序结果显示该片段序列长度为５９８?ｂｐ，见图２－６，包括正反向引物３＇－ＧＳＰ２、ＮＵＰ??以及ＣｓＣＯ以基因同源片段的部分序列和Ｐｌｏｙ?（Ａ）尾。因此，初步预测克隆得到??的是茶树Ｃ．ｙＣ＇（）Ｚ＾／基因的３＇末端。??７００ｂｐ?—＞?Ｉ??＾￣?约?６００ｂｐ??５００ｂｐ?—＾?■??图２－５茶树ＣｓＣＯＬＷ末端的克隆??Ｆｉｇ．?２－５?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣｓＣＯＬ４?３＇?ｅｎｄ?ｆｒｏｍ?Ｃ．?Ｓｉｎｅｎｓｉｓ．??Ｍ：?

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国水仙中NSVP2基因可促进烟草开花[J]. 夏鹏云,杨雪,沈馨,张伟,吴文婷,李小方.  上海交通大学学报(农业科学版). 2016(03)
[2]JOINTLESS/MACROCALYX/SLMBP21多基因转化番茄植株表型鉴定与分析[J]. 刘旦梅,张彦洁,裴雁曦.  中国细胞生物学学报. 2016(05)
[3]茶树LEAFY基因的克隆和表达分析[J]. 韩兴杰,徐玲玲,廖亮,李同建,邓辉胜,樊启水.  园艺学报. 2015(08)
[4]茶叶内含成分与人体健康[J]. 程启坤.  世界农业. 2015(05)
[5]过量表达柳树两个SVP1s基因提高拟南芥抗盐胁迫能力[J]. 余春梅,李敏,何新雨,李玉娟,王莹,谈峰,张健.  中国生物化学与分子生物学报. 2015(04)
[6]茶树花芽分化解剖与形态学研究[J]. 施雁飞,游新才,张逸,吕天航,张今今.  陕西师范大学学报(自然科学版). 2015(02)
[7]茶叶生物化学研究进展[J]. 宛晓春,李大祥,张正竹,夏涛,凌铁军,陈琪.  茶叶科学. 2015(01)
[8]中国水仙中SVP类似基因NSVP2可促进拟南芥的花序分枝[J]. 李小方,李瑞,张雪平,杨雪,邱艳,张伟,孙越,王洋.  植物生理学报. 2014(12)
[9]拟南芥开花时间调控的分子基础[J]. 张艺能,周玉萍,陈琼华,黄小玲,田长恩.  植物学报. 2014(04)
[10]植物SVP基因的研究进展[J]. 刘世男,林新春.  生物技术通报. 2014(06)

博士论文
[1]雷竹SVP-like、SOC1-like基因的克隆及功能分析[D]. 刘世男.北京林业大学 2016
[2]COL7及FOF1参与调控拟南芥发育的生化分析[D]. 王宏归.湖南大学 2013

硕士论文
[1]茶树MADS-box家族B类基因CsTM6的克隆及其与CsDEF的功能研究[D]. 唐红.陕西师范大学 2016
[2]茶树CsDEF基因克隆及AP3/DEF基因系统进化分析[D]. 秋梦颖.陕西师范大学 2015
[3]茶树MADS-box家族B类基因CsGLO1和CsGLO2的克隆及其与C类基因CsAG的功能研究[D]. 周坤.陕西师范大学 2015
[4]茶树CsAP1基因克隆及AP1基因系统进化分析[D]. 施雁飞.陕西师范大学 2014
[5]茶树CSAG基因克隆及AG基因系统进化分析[D]. 程国山.陕西师范大学 2014
[6]短日照不敏感型菊花开花时间基因CONSTANS-like的克隆与表达分析[D]. 陈阳.山西农业大学 2013
[7]小麦CONSTANS-like基因的克隆与分析[D]. 苏亚中.河南大学 2012
[8]棉花CONSTANS-like基因的克隆及表达分析[D]. 代军杰.中国农业科学院 2012
[9]二穗短柄草中VRT2-like基因的克隆及初步的功能分析[D]. 李文艳.山东农业大学 2011
[10]茶树花精油提取及其抗氧化和抑菌作用的研究[D]. 金玉霞.浙江大学 2010



本文编号：2994474