柿叶提取物对HEK293-APPswe转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2/HO-1途径的影响
发布时间：2021-01-26 22:37
目的:观察柿叶提取物（PLE）对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe（20E2）的抗氧化应激的影响,并从核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路研究其作用机制。方法:Western blot检测APP蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞上清Aβ1-40的量,确定细胞模型是否建立成功。用CCK-8检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影响,选定干预最佳浓度。设分组:SH-SY5Y为空白对照组（NC组）,20E2为模型组（20E2组）,用柿叶提取物干预为加药组（20E2+PLE组）。DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS的变化,ELISA检测各组细胞上清Aβ1-42的量,Western blot检测胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白的表达水平变化。结果:与模型组相比,加药组ROS表达减少,细胞外Aβ1-42浓度降低,细胞核内Nrf2表达增多,HO-1蛋白含量增加。结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Aβ1-42的聚集,激活Nrf2/H...
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2017,33(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Westernblot与ELISA法检测APP、Aβ1-40蛋白表达Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblot
Aβ1-40的量明显增加，NC组(47.28±5.36)pg/ml，20E2组细胞Aβ1-40含量(2105.84±70.69)pg/ml，两组差异具有统计学意义(P＜0.01，图1)。表明20E2符合阿尔茨海默病病理细胞模型。2.2CCK-8检测不同浓度的PLE对细胞活性的影响结果显示PLE在3～6μg/ml可增加细胞活性(P＜0.05)，超过6μg/ml后有抑制细胞活性的作用，为了减少药物毒性作用，最终选用有效浓度图1Westernblot与ELISA法检测APP、Aβ1-40蛋白表达Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblotandELISANote:*.P＜0.01vsNCgroup.图2不同浓度的PLE对细胞活性的影响Fig．2CellviabilityindifferentconcentrationsofPLEwasassayedbyCCK-8methodNote:*.P＜0.05vsNCgroup;#.P＜0.05vs20E2group.范围内的低浓度的3μg/ml为干预浓度。2.3PLE对20E2细胞内ＲOS变化的影响采用DCFH-DA荧光探针检测各组细胞ＲOS的表达，与NC组相比，20E2细胞内ＲOS荧光信号明显增强，氧化损伤明显，PLE干预后，ＲOS荧光信号减弱(图3)。2.4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响用ELISA检测相同数量级的各组细胞处理24h后细胞外Aβ1-42浓度，与NC组相比，模型组细胞外Aβ1-42明显增多，PLE干预后，加药组较模型组细胞外Aβ1-42明显减少(图4)。2.5Westernblot检测Nrf2，HO-1蛋白表达分别检测胞浆Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干预后，加药组较模型组胞核Nrf2表达增加，全细胞蛋白HO-1表达增加，差异具有统计学意义(图5)。图3PLE对20E2内ＲOS变化的影响(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.图4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-
检测各组细胞ＲOS的表达，与NC组相比，20E2细胞内ＲOS荧光信号明显增强，氧化损伤明显，PLE干预后，ＲOS荧光信号减弱(图3)。2.4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响用ELISA检测相同数量级的各组细胞处理24h后细胞外Aβ1-42浓度，与NC组相比，模型组细胞外Aβ1-42明显增多，PLE干预后，加药组较模型组细胞外Aβ1-42明显减少(图4)。2.5Westernblot检测Nrf2，HO-1蛋白表达分别检测胞浆Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干预后，加药组较模型组胞核Nrf2表达增加，全细胞蛋白HO-1表达增加，差异具有统计学意义(图5)。图3PLE对20E2内ＲOS变化的影响(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.图4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-42Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup;*.P＜0.05vsNCgroup.·856·中国免疫学杂志2017年第33卷
本文编号：3001931
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2017,33(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
Westernblot与ELISA法检测APP、Aβ1-40蛋白表达Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblot
Aβ1-40的量明显增加，NC组(47.28±5.36)pg/ml，20E2组细胞Aβ1-40含量(2105.84±70.69)pg/ml，两组差异具有统计学意义(P＜0.01，图1)。表明20E2符合阿尔茨海默病病理细胞模型。2.2CCK-8检测不同浓度的PLE对细胞活性的影响结果显示PLE在3～6μg/ml可增加细胞活性(P＜0.05)，超过6μg/ml后有抑制细胞活性的作用，为了减少药物毒性作用，最终选用有效浓度图1Westernblot与ELISA法检测APP、Aβ1-40蛋白表达Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblotandELISANote:*.P＜0.01vsNCgroup.图2不同浓度的PLE对细胞活性的影响Fig．2CellviabilityindifferentconcentrationsofPLEwasassayedbyCCK-8methodNote:*.P＜0.05vsNCgroup;#.P＜0.05vs20E2group.范围内的低浓度的3μg/ml为干预浓度。2.3PLE对20E2细胞内ＲOS变化的影响采用DCFH-DA荧光探针检测各组细胞ＲOS的表达，与NC组相比，20E2细胞内ＲOS荧光信号明显增强，氧化损伤明显，PLE干预后，ＲOS荧光信号减弱(图3)。2.4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响用ELISA检测相同数量级的各组细胞处理24h后细胞外Aβ1-42浓度，与NC组相比，模型组细胞外Aβ1-42明显增多，PLE干预后，加药组较模型组细胞外Aβ1-42明显减少(图4)。2.5Westernblot检测Nrf2，HO-1蛋白表达分别检测胞浆Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干预后，加药组较模型组胞核Nrf2表达增加，全细胞蛋白HO-1表达增加，差异具有统计学意义(图5)。图3PLE对20E2内ＲOS变化的影响(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.图4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-
检测各组细胞ＲOS的表达，与NC组相比，20E2细胞内ＲOS荧光信号明显增强，氧化损伤明显，PLE干预后，ＲOS荧光信号减弱(图3)。2.4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响用ELISA检测相同数量级的各组细胞处理24h后细胞外Aβ1-42浓度，与NC组相比，模型组细胞外Aβ1-42明显增多，PLE干预后，加药组较模型组细胞外Aβ1-42明显减少(图4)。2.5Westernblot检测Nrf2，HO-1蛋白表达分别检测胞浆Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干预后，加药组较模型组胞核Nrf2表达增加，全细胞蛋白HO-1表达增加，差异具有统计学意义(图5)。图3PLE对20E2内ＲOS变化的影响(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.图4PLE对细胞外Aβ1-42浓度的影响Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-42Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup;*.P＜0.05vsNCgroup.·856·中国免疫学杂志2017年第33卷
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