MCP-1，SP110和ESRRB基因多态性与结核病易感性的关系研究
发布时间：2021-01-27 02:49
目的（1）研究单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）,斑点蛋白110（Speckled protein110,SP110）和雌激素相关受体β（estrogen-related receptor bata,ESRRB）基因单核苷酸多态性与结核病（tuberculosis,TB）易感性之间的关系。（2）探讨血清ESRRB表达水平与结核病的相关性,以及血清ESRRB表达水平与其编码基因单核苷酸多态性的关系。方法（1）采用病例对照研究的设计方法,选取2018年2月至2019年4月期间在首都医科大学附属北京胸科医院住院的活动性结核病患者607例,纳入的患者均符合《肺结核诊断标准WS 288-2017》,选取同时期有结核密切接触史的健康体检者（均汉族）660例作为对照,使用竞争性等位基因特异性PCR（KASP）方法,分析MCP-1基因rs1024611位点,SP110基因rs1135791,rs11556887和rs9061位点和ESRRB基因rs12437118共计5个位点的单核苷酸多态性（single nucleotide po...
【文章来源】：北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结核分枝杆菌感染宿主结果示意图[6]
北京市结核病胸部肿瘤研究所硕士学位论文13图3ESRRB参与Wnt/Gsk3信号通路过程[35]趋化因子（CC）与TB发生的病理机制有关。它们通过招募、激活和协同刺激T细胞和单核细胞的能力介导先天性和适应性免疫反应。MCP-1是单核细胞的一种普遍趋化蛋白，是最早发现的CC亚家族趋化因子，趋化因子受体2（CCchemokinereceptor2，CCR2）是MCP-1的特异性受体，它与CCR2结合后能调节单核/巨噬细胞的迁移、渗透以及募集单核细胞和淋巴细胞等炎症相关细胞[36]，其表达可调节Th1细胞因子表达，从而下调炎症反应，在抗结核免疫应答和TB的发病机制中起重要作用[37]。近年来，越来越多的研究发现，MCP-1在肺部炎症性疾病（如慢性阻塞性肺疾并支气管哮喘、肺结核）及肺癌等肺部疾病的发生和发展过程中起着重要作用[38]。有文献报道，MCP-1基因敲除后的小鼠对早期的结核分枝杆菌感染更加敏感[39]。SP110基因是核体蛋白家族中的一员，编码干扰素诱导的核蛋白，主要表达于外周血和脾脏中，其表达量受干扰素调节。Pan等[40]在小鼠实验中发现胞内病原体体抑制子1（intracellularpathogenresistance1，lpr1）基因在结核免疫应答中发挥整合信号的作用，从而影响基因表达和促进宿主巨噬细胞细胞的凋亡。SP110是人类染色体中与lpr1相似度最高的基因，相似度虽仅有为41%，但是它位于人类第二号染色体，这与小鼠体内一号染色体的结核超级易感（supersusceptibilitytoTB，sst1）区域定点的一号染色体在系统发育树上是一致的，SP110与lpr1有类似的蛋白基序，他们被认为是可以调控基因的表达[41]。SP110基因多个SNPs位点已经被证实与结核易感性相关，可以控制宿主对M.tb感染的先天
北京市结核病胸部肿瘤研究所硕士学位论文22表2PCR循环条件SNP预变性变性退火变性退火读数循环数rs1243711895℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs102461195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs113579195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs1155688795℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs906195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min374.4基因分型结果读取应用ABI7500仪器GENOTYPING软件进行数据读取和分析。经过37个循环的PCR过后，每个等位基因和对应的荧光信号HEX或FAM被识别，形成等位基因分型图（见图4），从图中可辨别待测样本的基因分型结果，分型不明确样本的可进行多次试验，得出结果。图4ABI7500仪器识别KASP基因分型结果示意图注：靠近横纵坐标轴的红色和蓝色均表示纯合的基因型，中间对角线绿色表示杂合子基因型，靠近坐标轴原点的黑色方块表示空白对照，黑色X表示分型结果不明确。4.5质量控制（1）在加样过程中，每个96孔板中都设置3种不同基因型的已知样本作为阳性对照，至少设置2个空白孔作为阴性对照，以此来对基因分型结果进行检测。阳性对照由生工生物工程（上海）股份有限公司测序。（2）通过随机抽取不同分型结果样本进行测序，KASP方法的分型与测序结果一致性达100%，测序结果见图5。
本文编号：3002285
【文章来源】：北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结核分枝杆菌感染宿主结果示意图[6]
北京市结核病胸部肿瘤研究所硕士学位论文13图3ESRRB参与Wnt/Gsk3信号通路过程[35]趋化因子（CC）与TB发生的病理机制有关。它们通过招募、激活和协同刺激T细胞和单核细胞的能力介导先天性和适应性免疫反应。MCP-1是单核细胞的一种普遍趋化蛋白，是最早发现的CC亚家族趋化因子，趋化因子受体2（CCchemokinereceptor2，CCR2）是MCP-1的特异性受体，它与CCR2结合后能调节单核/巨噬细胞的迁移、渗透以及募集单核细胞和淋巴细胞等炎症相关细胞[36]，其表达可调节Th1细胞因子表达，从而下调炎症反应，在抗结核免疫应答和TB的发病机制中起重要作用[37]。近年来，越来越多的研究发现，MCP-1在肺部炎症性疾病（如慢性阻塞性肺疾并支气管哮喘、肺结核）及肺癌等肺部疾病的发生和发展过程中起着重要作用[38]。有文献报道，MCP-1基因敲除后的小鼠对早期的结核分枝杆菌感染更加敏感[39]。SP110基因是核体蛋白家族中的一员，编码干扰素诱导的核蛋白，主要表达于外周血和脾脏中，其表达量受干扰素调节。Pan等[40]在小鼠实验中发现胞内病原体体抑制子1（intracellularpathogenresistance1，lpr1）基因在结核免疫应答中发挥整合信号的作用，从而影响基因表达和促进宿主巨噬细胞细胞的凋亡。SP110是人类染色体中与lpr1相似度最高的基因，相似度虽仅有为41%，但是它位于人类第二号染色体，这与小鼠体内一号染色体的结核超级易感（supersusceptibilitytoTB，sst1）区域定点的一号染色体在系统发育树上是一致的，SP110与lpr1有类似的蛋白基序，他们被认为是可以调控基因的表达[41]。SP110基因多个SNPs位点已经被证实与结核易感性相关，可以控制宿主对M.tb感染的先天
北京市结核病胸部肿瘤研究所硕士学位论文22表2PCR循环条件SNP预变性变性退火变性退火读数循环数rs1243711895℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs102461195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs113579195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs1155688795℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min37rs906195℃15min94℃20s61℃25s94℃20s55℃60s37℃1min374.4基因分型结果读取应用ABI7500仪器GENOTYPING软件进行数据读取和分析。经过37个循环的PCR过后，每个等位基因和对应的荧光信号HEX或FAM被识别，形成等位基因分型图（见图4），从图中可辨别待测样本的基因分型结果，分型不明确样本的可进行多次试验，得出结果。图4ABI7500仪器识别KASP基因分型结果示意图注：靠近横纵坐标轴的红色和蓝色均表示纯合的基因型，中间对角线绿色表示杂合子基因型，靠近坐标轴原点的黑色方块表示空白对照，黑色X表示分型结果不明确。4.5质量控制（1）在加样过程中，每个96孔板中都设置3种不同基因型的已知样本作为阳性对照，至少设置2个空白孔作为阴性对照，以此来对基因分型结果进行检测。阳性对照由生工生物工程（上海）股份有限公司测序。（2）通过随机抽取不同分型结果样本进行测序，KASP方法的分型与测序结果一致性达100%，测序结果见图5。
本文编号：3002285
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