问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制

发布时间：2021-01-30 03:46

　　目的确定问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因（LA₀012、LA₀697和LA₄207）产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统,采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法（SPR）检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白（hCOL1/3/4/6）的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号钩端螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞（HUVEC和EOMA）时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果 vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白,但LA₀697和LA₄207基因还含有金属离子依赖性黏附位点（MIDAS）。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-... 

【文章来源】：中华微生物学和免疫学杂志. 2020,40(08)北大核心

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本文编号：3008178