含EGFR基因19号外显子和21号外显子重组质粒的构建及应用

发布时间：2021-02-01 19:00

　　目的:构建检测EGFR基因突变所用的质控品和标准品。方法:从健康人淋巴细胞基因组克隆,设计四对引物引入突变位点,RNA反转录cDNA,采用普通PCR的方法,扩增野生型EGFR基因外显子19片段和含缺失突变（del E746-A750）的EGFR基因外显子19片段,野生型EGFR基因外显子21和含点突变（L858R）的EGFR基因外显子21片段,并分别克隆至载体pEGFP-C1中,构建含EGFR基因外显子19和外显子21的重组质粒,用于检测EGFR基因突变的质控品和标准品。结果:构建出含EGFR基因外显子19和外显子21的重组质粒,野生型重组质粒命名为pEGFP-C1-EGFR-19和pEGFP-C1-EGFR-21,突变型重组质粒命名为pEGFP-C1-EGFR-19（del E746-A750）和pEGFP-C1-EGFR-21（L858R）,通过酶切和测序鉴定证明构建成功,浓度、纯度、稳定性达到质控品和标准品的要求。结论:成功构建了阳性和阴性对照质粒,为后续构建检测EGFR基因突变的方法使用。 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：34 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词对照
第1章 引言
第2章 重组质粒的构建和稳定性评价
    2.1 概述
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果
        2.3.1 野生型和突变型EGFR基因片段的获取
        2.3.2 重组质粒的酶切鉴定
        2.3.3 重组质粒测序鉴定
        2.3.4 质粒标准浓度的测定
        2.3.5 质粒稳定性的评价
    2.4 讨论
第3章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3013270