生物节律基因Bmal1和Per2在山竹子素抗肝癌细胞效应中的作用研究

发布时间：2021-02-02 04:23

　　目的:山竹子素（Garcinol,Garc）来源于热带植物藤黄科藤黄属植物山竹的果壳中,也称之为山竹醇、藤黄素。目前研究表明Garc具有抗肝癌的功能,但其抗肿瘤是否与调控生物节律相关尚不明确。本研究选取HepG2和huh7肝癌细胞株为研究对象,以生物信息学分析数据为导向,在探究Garc具有抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,诱导凋亡的效应的基础上,探讨生物节律基因的紊乱与肿瘤的增殖及迁移的密切关系,以期证实人体生物节律基因可作为药物抗肝癌的药理学靶点,为肝癌的临床治疗提出新的方向。方法:1.采用CCK-8法,克隆形成实验,Edu增殖实验检测Garc对肝癌细胞的增殖水平的调控,用细胞划痕实验及Transwell小室迁移,侵袭实验检测肝癌细胞迁移,侵袭能力,Huvec血管生成实验检测血管生成能力,检测线粒体膜电位实验检测肝癌细胞线粒体膜电位的变化,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP1（Y34）及cleaved-PARP1（E51）蛋白的表达水平。2.通过蛋白质免疫印迹法,细胞免疫荧光实验及RT-PCR,探讨山竹子素对生物节律基因Bmal1和Per2表达产物蛋白及mRNA的变化... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写索引
第一章 绪论
    1.1 原发性肝癌
    1.2 山竹子素（Garc）
        1.2.1 Garc来源及理化性质
        1.2.2 Garc抗肿瘤的分子机制及其信号通路
        1.2.3 Garc与肝癌
        1.2.4 小结
    1.3 生物节律基因
        1.3.1 生物节律基因概述
        1.3.2 生物节律基因功能及种类
        1.3.3 生物节律基因与肝癌的发生发展
        1.3.4 生物节律基因与肝癌的预后
    1.4 研究设计思路
        1.4.1 研究背景
        1.4.2 研究目的及意义
        1.4.3 研究方案
第二章Garc对肝癌增殖及凋亡的调控
    2.1 实验材料及仪器
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 主要仪器与设备
        2.1.3 常用试剂配制
        2.1.4 实验药品
    2.2 实验方法
        2.2.1 Hep G2 和Huh7 肝癌细胞的培养
        2.2.2 CCK-8 法与克隆形成实验检测肝癌细胞增殖活力
        2.2.3 Edu增殖实验检测细胞增殖率
        2.2.4 线粒体膜电位检测肝癌细胞线粒体膜电位变化
        2.2.5 蛋白质免疫印迹法检测增殖及凋亡相关蛋白的表达
        2.2.6 数据统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 Garc对肝癌细胞增殖活力的影响
        2.3.2 Garc对肝癌细胞凋亡诱导及凋亡蛋白cleaved-PARP1（Y34）及cleaved-PARP1（E51）的表达水平的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章Garc对肝癌迁移、侵袭及血管生成的调控
    3.1 实验材料及仪器
        3.1.1 实验细胞株
        3.1.2 实验常用仪器及设备
        3.1.3 实验试剂配制
        3.1.4 实验所需药品
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞划痕实验
        3.2.2 Transwell小室迁移及侵袭实验
        3.2.3 Huvec血管生成实验
        3.2.4 数据统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 Garc对肝癌细胞迁移,侵袭能力的影响
        3.3.2 Garc对Huvec血管形成能力的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章Garc对生物节律基因Bmal1 和Per2 的表达的调控
    4.1 实验材料及仪器
        4.1.1 实验对象
        4.1.2 材料与试剂
        4.1.3 主要仪器与设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 蛋白免疫印迹实验评价Garc对生物节律基因蛋白水平表达的影响
        4.2.2 细胞免疫荧光评价Garc对生物节律基因蛋白在细胞中的定位
        4.2.3 RT-PCR评价Garc对生物节律基因蛋白m RNA表达的影响
        4.2.4 数据统计分析
    4.3 实验结果
        4.3.1.蛋白质免疫印迹法检测Garc对生物节律基因蛋白表达的影响
        4.3.2. RT-PCR检测Garc对生物节律基因m RNA水平表达的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 外源性调节生物节律基因Bmal1 和Per2 对Garc抑制肝癌细胞增殖及迁移作用中的影响
    5.1 实验材料及仪器
        5.1.1 实验对象
        5.1.2 实验仪器及设备
        5.1.3 实验药品及试剂
    5.2 试验方法
        5.2.1 慢病毒转染预实验
        5.2.2 慢病毒正式感染
        5.2.3 Per2 过表达慢病毒和Bmal1 过表达慢病毒稳定转染肝癌Huh7 和Hep G2细胞株转染效率检测
        5.2.4 Per2 敲低慢病毒和Bmal1 敲低慢病毒稳定转染肝癌Huh7 和Hep G2 细胞株转染效率检测
        5.2.5 生物节律基因Bmal1 和Per2 过表达对肝癌细胞增殖活力及迁移能力的影响
        5.2.6 生物节律基因Bmal1 和Per2 的敲低对肝癌细胞增殖活力及迁移能力的影响
    5.3 实验结果
        5.3.1 Per2过表达慢病毒稳定转染肝癌 HepG2和huh7细胞株转染效率检测
        5.3.2 生物节律基因Bmal1 和Per2 过表达对肝癌细胞增殖活力及迁移能力的影响
        5.3.3 生物节律基因Bmal1 和Per2 的敲低对肝癌细胞增殖活力及迁移能力的影响
    5.4 讨论
    5.5 小结
第六章 人生物节律基因Bmal1, Per2 的蛋白生物信息学分析
    6.1 材料与仪器
        6.1.1 材料与试剂
    6.2 试验方法
        6.2.1 Genecards网站对人Bmal1 和Per2 蛋白的亚细胞定位分析
        6.2.2 SOPMA网站和布鲁克海文蛋白质数据库（PDB）对人Bmal1 和Per2 蛋白空间结构分析
        6.2.3 String蛋白质相互作用预测网站对人Bmal1 和Per2 蛋白质预测
    6.3 实验结果
        6.3.1 人Bmal1 和Per2 蛋白的亚细胞定位分析
        6.3.2 人Per2, Bmal1 蛋白空间结构分析
        6.3.3 人Bmal1, Per2 相互作用蛋白质预测及分析
    6.4 讨论
    6.5 小结
第七章 结论与展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的学术论文及参加的学术会议



本文编号：3014044