大豆实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

发布时间：2021-02-04 09:11

　　选择合适的内参基因可以提高定量分析中目标基因表达的准确性。本研究选取大豆（Glycine max）不同发育时期的18个组织样本,利用实时荧光定量PCR技术,分析了大豆60S、ABC、ACT2/7、ACT11、CYP2、ELF1A、ELF1B、Fbox、G6PD、MTP、PEPKR1、TUB4、TUA5、UBC4等14个内参基因在不同组织中表达量的变化,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper三种软件对各基因在四个重要发育时期以及在叶片组织中的表达稳定性进行了评价。研究表明:大豆内参基因Fbox、ABC、G6PD和ACT11分别为出苗期（VE）、第一片三叶期（V1）、始花期（R1）和初荚期（R3）最稳定的内参基因; 60S为叶片组织中最稳定的内参基因;在全部样本的整体评价中, Fbox为最稳定的内参基因。此外,通过分析大豆噻唑合成酶基因GmPGL1的表达量,进一步证明了内参基因筛选结果的可靠性和在大豆基因表达分析中的适用性。本研究为准确定量分析大豆关键发育时期不同组织中的基因表达提供参考基因。 

【文章来源】：植物生理学报. 2020,56(09)北大核心

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 总RNA提取及c DNA合成
        1.2.2 引物设计合成与验证
        1.2.3 RT-qPCR
        1.2.4 内参基因表达稳定性分析
2 实验结果
    2.1 内参基因特异性验证
    2.2 内参基因在不同发育时期不同组织中表达量分析
    2.3 候选内参基因稳定性分析
        2.3.1 ge Norm软件分析
        2.3.2 Norm Finder软件分析
        2.3.3 Best Keeper软件分析
        2.3.4 Ref Finder分析
    2.4 内参基因验证
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]玉米粗缩病诱导下实时荧光定量PCR内参基因的选择[J]. 代资举,王艳,王新涛,杨青,张莹莹,李保全,王立平.  植物生理学报. 2019(10)
[2]板栗实时定量PCR内参基因的筛选与验证[J]. 陈国松,李靖同,刘阳,曹庆芹,张卿,秦岭,邢宇.  植物生理学报. 2019(03)
[3]黄梁木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 张登,李景剑,张梦洁,包钰韬,杨霄,徐武云,欧阳昆唏,陈晓阳.  植物学报. 2018(06)
[4]核桃内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价[J]. 李雪,潘学军,张文娥,张睿,陈静.  植物生理学报. 2017(09)
[5]柑橘内参基因的稳定性评价[J]. 肖翠,严佳文,龙桂友,戴素明,李大志,邓子牛.  果树学报. 2012(06)



本文编号：3018073